[發明專利]一種基于抗生素篩選轉基因水稻種子的方法

無效

• 申請號: 200810047085.3
• 申請日: 2008-03-18
• 公開（公告）號: CN101241123A
• 公開（公告）日: 2008-08-13
• 發明（設計）人: 李陽;李陽生
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: G01N33/48
• 分類號: G01N33/48
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 王敏鋒

1、一種基于抗生素篩選轉基因水稻種子的方法，它包括下列步驟：

A、利用抗生素篩選轉基因水稻種子，首先是篩選抗生素濃度確定：設定抗生素選擇梯度，梯度為：0-1000mg/l，將未轉基因的受體種子在其中萌發，幼芽生長被抑制的抗生素濃度為篩選抗生素濃度；其次是篩選條件：在2.5mm深，濃度的抗生素溶液中鋪墊兩層濾紙，濃度為卡那霉素400mg/l和潮霉素600ul/l，在其上均勻鋪撒種子密度小于1個/平方厘米轉基因水稻種子；陰性對照是未進行基因轉化的受體種子，陽性表型對照為未加抗生素的受體種子；第三是培育條件，密閉空間條件下26-30度暗培養5天；第四是結果判定：結果出現三種情況的種子：①陽性表型：芽體正常，根生長旺盛，根長超過2cm；②陰性表型：芽體和根生長受到典型抑制，根長小于0.5cm；③萌發不正常的種子，沒有發芽或者芽體不正常；

B、轉基因植株的基因型純合雜合的判定方法：首先是設置對照：用未轉基因的受體種子做一個加入抗生素的陰性表型對照和一個未加入抗生素的陽性表型對照；其次是按照以抗生素為基礎篩選轉基因陽性種子的方法為基礎，判定轉基因株系的基因型，在進行此株系的種子篩選時設置一個不加抗生素的對照即判斷出來；第三是將加入抗生素的和沒有加抗生素的對照實驗對比，陽性表型率一致則此株系純合，其后代也都為純合；沒有加入抗生素的對照高于加入抗生素的發芽陽性率，此株系為轉基因雜合，其后代就有孟德爾分離；加入抗生素的表現為陰性，不加抗生素的為陽性表明此株系為非轉基因株系；或直接統計篩選結果，陽性率為0，則為陰性純合株系，陽性種子與陰性種子的比率符合孟德爾分離規律則為雜合型，陽性率接近100則為陽性純合株系。