[發明專利]一種從具鞘微鞘藻中提取藻藍蛋白的方法

無效

• 申請號: 200810046772.3
• 申請日: 2008-01-25
• 公開（公告）號: CN101220080A
• 公開（公告）日: 2008-07-16
• 發明（設計）人: 謝作明;劉永定;王焰新;沈銀武;胡春香
• 申請（專利權）人: 中國地質大學（武漢）
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14
• 代理公司: 武漢華旭知識產權事務所
• 代理人: 劉榮

1.一種從具鞘微鞘藻中提取藻藍蛋白的方法，其特征在于包括如下步驟：

A、培養液的配制：按每升水加入硝酸鈉0.8～2.5g、磷酸氫二鉀0.02～0.05g、硫酸鎂0.06～0.09g、氯化鈣0.02～0.05g、檸檬酸0.004～0.008g、檸檬酸鐵銨0.004～0.008g、乙二胺四乙酸二鈉鹽0.001～0.003g、碳酸鈉0.01～0.04g，微量元素溶液0.5～2ml，其中微量元素溶液按每100ml蒸餾水中加入硼酸270～300mg、四水氯化錳170～200mg、七水硫酸鋅18～25mg、二水鉬酸鈉15～30mg、五水硫酸銅6～10mg，完全溶解后攪勻制得培養液；

B、具鞘微鞘藻的培養：首先是一級培養，將具鞘微鞘藻藻種接入培養液中靜止培養或通氣培養，調節氣流在1.5～3.5L.min^-1，光強控制在65～85μE.m^-2.s^-1，溫度控制在22～35℃，培養5～10天后轉入到二級培養；其次是二級培養，將一級培養所得的培養物接入到新的培養液中通氣培養，調節氣流在2.5～5L.min^-1，無菌處理，光強控制在75～95μE.m^-2.s^-1，溫度控制在22～35℃，培養5～10天后轉入到三級培養；第三是三級培養，將二級培養所得的培養物接入到新的培養液中通氣培養，調節氣流在3～6L.min^-1，無菌處理，光強控制在70～100μE.m^-2.s^-1，溫度控制在22～35℃，培養5～10天后作為繼續培養的接種種源；第四是繼續培養，首先是小循環培養池培養，將三級培養后所得的藻種，接入小循環培養池，控制溫度在22～35℃，利用自然光進行光照，控制光照強度在120～180μE.m^-2.s^-1，攪動培養基；其次是大循環培養池培養，將小循環培養池中培養4～7天后的具鞘微鞘藻轉接到大循環培養池中，將大循環培養池中控制溫度在22～35℃，利用自然光進行光照，控制光照強度在120～180μE.m^-2.s^-1培養10～20天后的具鞘微鞘藻過濾收得具鞘微鞘藻藻漿；

C、具鞘微鞘藻粉的制備：將藻漿經過離心獲得具鞘微鞘藻藻泥，經濃縮、脫水、干燥、粉碎后得到具鞘微鞘藻粉；

D、具鞘微鞘藻藻藍蛋白的抽提：向具鞘微鞘藻粉中加入7～10倍重量的0.05～0.1mol.L^-1，pH值為6.0～8.0的磷酸緩沖溶液，充分攪勻，然后置于-10～-20℃下冰凍，待凍結后取出，置于20～30℃下融溶，待其完全融溶后，再將其冰凍，如此反復凍融3～5次，然后3000～6000rpm離心10～15min，收集上清液，即為藻藍蛋白粗提液；

E、純化：在冰浴條件下，在藻藍蛋白的粗提液中加入飽和度為50～70％的硫酸銨避光鹽析20～40min，然后在3～5℃下3000～6000rpm離心15～25min，棄除上清液，用一倍體積的0.05～0.1mol.L^-1，pH值為6.0～8.0的磷酸緩沖液溶解沉淀物，避光透析20～30h后離心，取上清液用0.05～0.1mol.L^-1，pH值為6.0～8.0的磷酸緩沖液平衡好的DEAE-52離子交換柱，并用0.05～0.1mol.L^-1，pH值為6.0～8.0的磷酸緩沖液和0.1～0.3mol.L^-1的NaCl溶液洗脫，用收集藍色組分，冷凍干燥得純化的藻藍蛋白。

2.根據權利要求1所述的一種從具鞘微鞘藻中提取藻藍蛋白的方法，其特征在于：小循環培養池與大循環培養池中培養液的體積比為1∶20～25。