[發(fā)明專利]二次高速逆流色譜分離射干中異黃酮類單體化合物的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810042681.2
• 申請日: 2008-09-09
• 公開（公告）號(hào): CN101357933A
• 公開（公告）日: 2009-02-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范國榮;周婷婷;馮超;謝瑛;聞俊;崔莉俊;陳丹霞;李霽;解蕊;魏華;張鶴
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07H17/07
• 分類號(hào): C07H17/07;C07D311/36;A61K36/88
• 代理公司: 上海德昭知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 丁振英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從鳶尾科植物射干中分離純化高純度的單體化合物鳶尾苷、野鳶尾苷、鳶尾苷元、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素素的方法。

背景技術(shù)

射干為鳶尾科(Iridaceae)植物射干Belamcanda?Chinesis(L)DC.的干燥根莖，具有解毒利咽，清肺祛痰之功效，主產(chǎn)于湖北、河南、江蘇、安徽，湖南、浙江、貴州、云南等地亦產(chǎn)，在廣東、廣西少數(shù)地區(qū)用射干系干燥全草。射干始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，藥理及臨床實(shí)驗(yàn)表明：射干中異黃酮類化合物具有顯著的抗炎、抗菌、抗病毒、清除自由基、抗過敏等生物活性與藥理作用。其中鳶尾苷(Tectoridin)、野鳶尾苷(Iridin)、鳶尾苷元(Tectorigenin)、野鳶尾黃素(Irigenin)和次野鳶尾黃素素(Irisflorentin)是射干中的主要活性成分(Xu?YL，et?al.J.Acta?Bot?Yunnan，1999，21(1)：125-130；Li?YQ，et?al.J.Acta?Pham?Sin，1986，21(11)：836-841；Li?R，et?al.J.Ch?Pham?Univer，2003，34(2)：122-124。)它們的結(jié)構(gòu)式如下：

鳶尾苷(Tectoridin)??????????野鳶尾苷(Iridin)

鳶尾苷元(Tectorigenin)?????????野鳶尾黃素(Irigenin)

次野鳶尾黃素(Irisflorentin)

目前，國內(nèi)外多采用柱色譜法和重結(jié)晶等傳統(tǒng)方法分離純化中藥射干中的有效單體，這類方法或需使用大量有毒的有機(jī)溶劑，會(huì)造成環(huán)境污染；或成本高且操作繁瑣，如聚酰胺填料，耗時(shí)費(fèi)力(HJ?Park，et?al.Phytochemistry.1999，51：147；Salwa?F?Farag，et?al.Phytochemistry.1999，50：1407)，而且固定相對樣品有不可逆性吸附作用，造成樣品損失嚴(yán)重。另外，由于射干中各主要成分與干擾組分極性極為相近，通常無法在較短時(shí)間內(nèi)使目標(biāo)化合物得到有效的分離導(dǎo)致所得產(chǎn)品純度不高，需借助多次重復(fù)制備進(jìn)行純化而造成目標(biāo)化合物損失較多。

高速逆流色譜(High-speed?counter-current?chromatography?HSCCC)是一種較新的液液分配色譜技術(shù)，它不用任何固體支撐體或載體而克服了傳統(tǒng)分離方法對樣品的不可逆性吸附作用，滯留在柱中的樣品可以通過多種洗脫方式予以完全回收，理論回收率為100％，同時(shí)還具有應(yīng)用范圍廣、適應(yīng)性好、操作簡單、分離效果好和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。目前高速逆流色譜技術(shù)也用于中藥中有效單體的分離純化，如彭金詠等以乙酸乙酯：正丁醇：水(2：1：3)為溶劑體系從白花敗醬草從分離制備異牡荊苷和異葒草苷成分。(J.Y.Peng，et?al.J?Chromatogr?A.2005，1074：111-115)

國內(nèi)外尚未見有將高速逆流色譜技術(shù)應(yīng)用于中藥射干中單體化合物的分離純化。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服柱色譜法和重結(jié)晶等傳統(tǒng)方法分離純化射干中有效單體的缺點(diǎn)，提供一種制備工藝簡單快速、回收率高、純度高且適于工業(yè)化生產(chǎn)的從射干中分離純化異黃酮類單體化合物的方法。

射干中主要活性成分為中等極性異黃酮類成分，其中大多結(jié)構(gòu)十分相近，傳統(tǒng)的制備液相色譜技術(shù)無法在短時(shí)間內(nèi)使各極性相近的異黃酮類化合物獲得較好的分離。

本發(fā)明采用二次高速逆流色譜來分離射干中單體化合物，特別是采用兩套不同溶劑體系高速逆流色譜技術(shù)將目標(biāo)化合物鳶尾苷、野鳶尾苷、鳶尾苷元、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素與其他極性相近的干擾成分分離，從而獲得高純度的目標(biāo)化合物。

本發(fā)明提供了一種從射干中分離純化單體化合物鳶尾苷、野鳶尾苷、鳶尾苷元、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素素的方法，該方法包括如下步驟：

A.第一次高速逆流色譜分離純化：

構(gòu)成高速逆流色譜固定相、流動(dòng)相的溶劑體系為正己烷:正丁醇:甲醇:水＝1:4:1.5～2:6或乙酸乙酯:正丁醇:水＝2:1:3，在分液漏斗中充分振搖后靜止分層，上相為固定相，下相為流動(dòng)相；先使逆流色譜儀柱子中充滿固定相，然后使主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，再泵入流動(dòng)相，取射干粗提物溶于少量上相和下相，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測器譜圖接收流分“I”、“II”；對高速逆流固定相液進(jìn)行回收，揮干有機(jī)溶劑，得第一次高速逆流固定相揮干物；

B.第二次高速逆流色譜分離純化：