[發明專利]一種含有細胞生長因子的間充質干細胞懸液及其用途無效

申請號：	200810040558.7	申請日：	2008-07-15
公開（公告）號：	CN101327318A	公開（公告）日：	2008-12-24
發明（設計）人：	夏照帆;王鈺;唐洪泰;肖仕初;楊曉妍	申請（專利權）人：	中國人民解放軍第二軍醫大學
主分類號：	A61K38/18	分類號：	A61K38/18;A61K9/10;A61P17/02
代理公司：	上海德昭知識產權代理有限公司	代理人：	丁振英
地址：	200433***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種含有細胞生長因子間充質干細胞及其用途
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及醫學創面修復技術領域，是一種可用于創面修復含有人表皮生長因子和牛堿性成纖維細胞生長因子的間充質干細胞懸液，特別是用于促進深度燒傷創面的愈合。

技術背景

深度燒傷包括深II度和III度燒傷。深II度燒傷為皮膚真皮深層的損傷，深II度創面有真皮殘留，網織層內存有毛囊、汗腺和皮脂腺，這些皮膚附件的上皮增殖可形成修復創面的上皮島，雖然不需植皮創面也能自行愈合，但愈合后多遺留瘢痕，形成各種攣縮畸形。而燒傷創面愈合的時間愈長，愈合產生的瘢痕及瘢痕攣縮而導致的功能障礙和外觀異常愈明顯。同時對于大面積深度燒傷或皮膚缺損傷患者由于自體皮源不足，多年來運用網狀植皮、郵票植皮、小皮片移植、微粒植皮等技術來擴大皮膚覆蓋面積，但這些方法皮膚擴增面積有限，難以滿足大面積皮膚缺損患者盡早封閉創面的需求，在加快創面愈合的速度和改進創面愈合質量，從而在減少功能障礙的發生率和提高患者生活質量方面，目前常規應用的這些方法顯然還存在著很多不足。因此加速深度燒傷創面愈合和有效地控制后期瘢痕增生尤為重要，也是目前燒傷治療的重點和難點。

近年來，間充質干細胞(mesenchymal?stem?cells，MSCs)在創傷修復方面的作用日益受到各國學者的關注。間充質干細胞具有多向分化潛能性，在體內正常循環中能夠分布于多種組織和器官。國內外已有大量研究證實間充質干細胞可以分化為骨、軟骨、脂肪、肌肉、肌腱、心肌、肝臟、神經、腎臟等多種組織細胞。體內研究也表明，燒傷、創傷、慢性潰瘍等可以促使間充質干細胞向創面遷移并分化為皮膚組織細胞參與創面愈合。然而，間充質干細胞的定向分化調控需要特定的組織微環境，如相關細胞因子的參與(詳見曹亮，胡祥，安偉德等.不同細胞因子體外誘導骨髓間充質干細胞定向肝細胞分化的研究.中華實驗外科雜志，2006，23(7)：871；馬嵐，李克，許煊慧等.不同細胞因子對間充質干細胞向神經細胞誘導分化的影響.中國臨床康復，2005，9(46)：1-3.)。研究證實，表皮生長因子和堿性成纖維生長因子對促進創面愈合起著至關重要的作用，但至今未見有關將間充質干細胞聯合表皮生長因子和堿性成纖維生長因子外用能明顯促進深度燒傷創面修復的報道。

發明內容

本發明提供一種可用于創面修復的含細胞生長因子的間充質干細胞的懸液。所說的細胞生長因子為重組人表皮生長因子和重組牛堿性成纖維細胞生長因子。

本發明細胞懸液的組分如下：

1.間充質干細胞，間充質干細胞的濃度為1×10⁵個/毫升-1×10⁷個/毫升；所說的間充質干細胞為人類骨髓來源的間充質干細胞或人早胚來源間充質干細胞；

2.人表皮生長因子，濃度為1000IU/毫升；

3.牛堿性成纖維細胞生長因子，濃度為8000IU/毫升；

4.細胞的懸浮液，為無血清DMEM。

本發明細胞懸液的制備方法為：

1.制備間充質干細胞懸液：

按常規分離、培養和擴增人類骨髓來源的間充質干細胞或人早胚來源間充質干細胞，培養基為含2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素和含10％胎牛血清的DMEM。

2.制備含有人表皮生長因子和牛堿性成纖維細胞生長因子的間充質干細胞懸液：

按常規將上述間充質干細胞懸液重懸于無血清DMEM，細胞濃度為1×10⁵個/毫升-1×10⁷個/毫升，再加入人表皮生長因子和牛堿性成纖維細胞生長因子，人表皮生長因子濃度為1000IU/毫升，牛堿性成纖維細胞生長因子濃度為8000IU/毫升，即成本發明間充質干細胞懸液。