[發明專利]一種植物重組表達載體及其包含該載體的轉化體

無效

• 申請號: 200810039590.3
• 申請日: 2008-06-26
• 公開（公告）號: CN101613713A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發明（設計）人: 張磊;邸鵬;肖瑩;陳軍峰;唐克軒;龔一富;方平;孫宇
• 申請（專利權）人: 上海海泰藥業有限公司;中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種植物重組表達載體及其包含該載體 的轉化體。

背景技術

轉錄因子(transcription?factor，TF)又稱反式作用因子，是一群能與真核基因啟動子 區域中的順式作用元件發生特異性結合，從而保證目的基因以特定的強度、在特定的 時間與空間表達的蛋自質分子。當植物感受外界干旱、高鹽、激素、病害時，通過一 系列信號傳遞，激發轉錄因子，轉錄因子與相應的順式作用元件結合后，激活RNA聚 合酶II轉錄復合物，從而啟動特定基因的轉錄表達，最后通過基因產物的作用對內、 外界信號做出的調節反應。植物許多基因的表達都是由特定的轉錄因子與特定的順式 作用元件相互作用調控的。

在植物代謝研究中，通過對特定轉錄因子的表達或者抑制的調控，可以同時調控 代謝途徑上多個對轉錄因子響應的關鍵酶基因，打破代謝物代謝途徑上的瓶頸，從而 達到對整個代謝途徑進行調控的目的。目前對轉錄因子的研究表明，轉錄因子對植物 代謝的調節是通過合成與基因啟動子上相應的順式作用元件結合的蛋白而實現的。由 于轉錄因子對于代謝途徑上的關鍵酶的調控具有特異性，所以構建只包含轉錄因子的 載體有時不能夠達到同時調控代謝途徑上所有關鍵酶基因的目的，而構建轉錄因子加 關鍵酶基因的載體又存在啟動子沖突的問題。因此，通過構建轉錄因子加關鍵酶基因 的載體，并對關鍵酶進行啟動子修飾是解決這一問題的最佳策略。

發明內容

本發明的目的是提供一種植物重組表達載體。

本發明所提供的植物重組表達載體，包含轉錄因子、啟動子和關鍵酶基因的的融 合序列，所述的啟動子為包含對轉錄因子特異響應元件的啟動子。

所述啟動子可為組成型、誘導型或組織特異性表達啟動子，優選為帶有jere元件 的啟動子，最優選為tdc啟動子。

所述轉錄激活因子可為orca2、orca3、PAP1、PAP2、OSB1、TTG1、an1、an2、an11、 jaf13、del、ant1、Lc、TT16、B、Sn、Hopi、C1、P1、ANL2、TTG2、tt1、tt2、CPRF、 Ntliml、MybA中之一。

在一些實施方案里，所述轉錄激活因子優選為具有與orca3相同或相似功能的所 有具有DNA結合蛋白區AP2結構域和轉錄激活結構域的轉錄激活因子如win1， orca2，erf1等，以及其它具有相似轉錄激活活性功能的基因；尤其優選為orca3。

所述關鍵酶基因可包括一個目的基因或多個相同或不同的目的基因。

所述關鍵酶基因可以是任何可以利用的基因，如g10h基因。g10h基因具有SEQ?ID NO.1所述的序列。

所述植物重組表達載體可含有篩選標記。所述篩選標記可為潮霉素(hygromycin) 和卡鈉霉素(kanamycin)。

本發明的第二個目的是提供包含上述植物重組表達載體的轉化體。

本發明所述轉化體的制備方法，包括以下步驟：

制備植物重組表達載體；

轉化植物材料；

篩選轉基因植物材料。

本發明的優點或有益效果本發明通過構建新型植物重組表達載體可以同時調節植 物代謝途徑上的多個關鍵酶基因的表達，不僅包含對轉錄因子響應的關鍵酶基因，也 包括對轉錄因子不響應的關鍵酶基因，從而達到打通代謝流，調控目標代謝產物含量 的目的。

附圖說明

圖1.rolB、rolC和hpt基因的PCR電泳圖。

圖2.關鍵酶g10h及轉錄因子orca3的PCR電泳圖。

具體實施方式

下面對本發明進行更加詳細的描述

本發明中對植物代謝產物的調節可以包括提高有活性成分的含量或者降低毒性成 分的含量等，在本發明中“轉錄因子”的選擇不特定于某個轉錄因子，只要對于植物 代謝途徑有調控作用的“轉錄因子”均可以用來進行代謝調控研究，“特異啟動子” 必須為包含對“轉錄因子”特異響應元件的啟動子，并不特定于某一啟動子，“關鍵 酶基因”可以是單個基因或者多個基因，為目標代謝物合成途徑上的限速酶基因且自 然狀態下對轉錄因子的調控不響應。