[發(fā)明專利]一種提高林可霉素產(chǎn)量的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810037079.X
• 申請(qǐng)日: 2008-05-07
• 公開（公告）號(hào): CN101265491A
• 公開（公告）日: 2008-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王倩;葉蕊芳;史婷婷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P19/64
• 分類號(hào): C12P19/64;C12R1/565
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 繆利明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種提高林可霉素產(chǎn)量的方法。

背景技術(shù)

林可霉素(Lincomycin，簡(jiǎn)稱LCM)又稱潔霉素，對(duì)革蘭氏陽性菌有很好的作用，它沒有交叉耐藥性而且本身的毒性較低，所以被廣泛應(yīng)用于由革蘭氏陽性菌引起的疾病，同時(shí)，對(duì)革蘭氏陰性菌亦有一定的抑制作用，林可酰胺類抗生素已成為臨床應(yīng)用上主要的抗生素之一。

因此，對(duì)林可霉素的研究成為了一個(gè)熱點(diǎn)。但國內(nèi)對(duì)其研究主要集中在菌種選育方面，而國外同行對(duì)其發(fā)酵過程的研究主要集中在林可霉素合成途徑的研究上，對(duì)工藝改進(jìn)方面的研究只有培養(yǎng)溫度對(duì)林可霉素產(chǎn)量的影響的報(bào)道，金屬離子對(duì)林可霉素產(chǎn)量的影響尚未見到報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本申請(qǐng)的發(fā)明人在研究提高林可霉素產(chǎn)量的過程中發(fā)現(xiàn)，向林肯鏈霉菌(Streptomyceslincolnensis)的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入金屬離子，能提高林可霉素的產(chǎn)量。

因此，本發(fā)明的目的在于，提供一種提高林可霉素產(chǎn)量的方法，該方法通過向林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入金屬離子來實(shí)現(xiàn)。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，加入的金屬離子為單獨(dú)加入。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，加入的金屬離子為復(fù)合加入。

使用本發(fā)明提供的方法，通過向林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中加入金屬離子，無論是加入單獨(dú)的金屬離子(例如Mg²⁺、Fe³⁺和Zn²⁺)，還是加入復(fù)合金屬離子(例如Mo⁶⁺、Mg²⁺、Fe³⁺和Zn²⁺組成的復(fù)合金屬離子)，均能顯著提高林可霉素的生物合成。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。

下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，如《分子克隆：實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(New?York：Cold?Spring?Harbor?Laboratory?Press，1989)中所述的條件或生產(chǎn)廠商推薦的條件進(jìn)行。

在本發(fā)明的下述實(shí)施例中，使用的林肯鏈霉菌(Streptomyces?lincolnensis)已于2008年04月25日提交位于武漢大學(xué)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏號(hào)為CCTCC?M?208064。

除特別說明外，以下實(shí)施例中所使用的％，‰均為重量比。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：0.8％(NH₄)₂SO₄，0.8％NaNO₃，0.5％NaCl，0.02％K₂HPO₄，3％黃豆餅粉，0.2％玉米漿，0.8％CaCO₃，5％葡萄糖，pH7.0。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，林可霉素的效價(jià)采用杯碟法進(jìn)行檢測(cè)，中國藥典2005版(二部)。

實(shí)施例1、添加金屬離子對(duì)林可霉素產(chǎn)量的影響

配制林可霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，并向林可霉素發(fā)酵培養(yǎng)基中分別添加Na₂MoO₄、CoCl₂、MnCl₂、MgCl₂、FeCl₃、FeCl₂、ZnCl₂、CuCl₂，使它們?cè)谙鄳?yīng)的培養(yǎng)基中的重量比濃度分別為0.001‰，0.005‰，0.01‰，0.02‰以及0.05‰，同時(shí)，以不添加金屬離子的林可霉素原始發(fā)酵培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基，接入林肯鏈霉菌(Streptomyces?lincolnensis)發(fā)酵培養(yǎng)168小時(shí)后，取樣測(cè)定林可霉素的效價(jià)，結(jié)果如表1所示。

表1、添加金屬離子對(duì)林可霉素產(chǎn)量的影響

根據(jù)表1的結(jié)果，在培養(yǎng)基中添加上述金屬離子后，林可霉素的效價(jià)發(fā)生了不同程度的改變，其中，添加0.001～0.005‰的MgCl₂，0.01～0.05‰的FeCl₃或0.001～0.005‰的ZnCl₂后，林可霉素的效價(jià)獲得提高明顯。

實(shí)施例2、復(fù)合添加金屬離子對(duì)林可霉素產(chǎn)量的影響

2.1、金屬離子正交試驗(yàn)