[發(fā)明專利]D-氨甲酰水解酶的突變體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810035067.3
• 申請(qǐng)日: 2008-03-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101544969A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-09-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊晟;余宏;李鍵;張大龍;姜衛(wèi)紅;楊蘊(yùn)劉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12N9/78
• 分類號(hào): C12N9/78;C12N15/55;C12N15/63;C12N1/21;C12P13/04;C12R1/19
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 繆利明

1.一種D-氨甲酰水解酶的突變體，其特征在于，所述突變體的氨基酸序列由以下任 一項(xiàng)所述的氨基酸序列組成：

A：D-氨甲酰水解酶的氨基酸序列中第12位的谷氨酰胺突變?yōu)榉菢O性氨基酸，所述 非極性氨基酸為纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸或色氨酸；

B：D-氨甲酰水解酶的氨基酸序列中第263位的蘇氨酸突變?yōu)榧琢虬彼幔?

C：D-氨甲酰水解酶的氨基酸序列中第263位的蘇氨酸突變?yōu)榻z氨酸；

D：D-氨甲酰水解酶的氨基酸序列中第12位的谷氨酰胺突變?yōu)樘K氨酸，且第263位 的蘇氨酸突變?yōu)榻z氨酸；

其中，所述D-氨甲酰水解酶的氨基酸序列為如SEQ?ID?NO.2所示的D-氨甲酰水解酶 -M3序列。

2.一種編碼權(quán)利要求1所述的D-氨甲酰水解酶突變體的DNA序列。

3.如權(quán)利要求2所述的DNA序列，其特征在于，由以下任一項(xiàng)所述的DNA序列組 成：

A、SEQ?ID?NO.1所示的D-氨甲酰水解酶-M3的基因序列中第34-36bp的CAA突變 為GTA、CTA、ATA、TTC或TGG；

B、SEQ?ID?NO.1所示的D-氨甲酰水解酶-M3的基因序列中第787-789bp的ACG突 變?yōu)锳TG；

C、SEQ?ID?NO.1所示的D-氨甲酰水解酶-M3的基因序列中第787-789bp的ACG突 變?yōu)門(mén)CG；

D：SEQ?ID?NO.1所示的D-氨甲酰水解酶-M3的基因序列中第34-36bp的CAA突變 為ACT，且第787-789bp的ACG突變?yōu)锳GT。

4.如權(quán)利要求2所述的D-氨甲酰水解酶突變體的DNA序列，其特征在于，所述D- 氨甲酰水解酶-M3的基因序列中第52-54bp為ACG，第88-90bp為AAC，且第100-102bp 為GAA。

5.一種重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒克隆有如權(quán)利要求1所述的D-氨甲酰 水解酶的突變體的編碼序列。

6.一種基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是將權(quán)利要求5所述的重組質(zhì)粒 轉(zhuǎn)化入宿主細(xì)胞而獲得。

7.如權(quán)利要求6所述的基因工程菌，其特征在于，所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌。

8.如權(quán)利要求7所述的基因工程菌，其特征在于，所述大腸桿菌是大腸桿菌E.coli? DH10B。

9.如權(quán)利要求1所述的D-氨甲酰水解酶突變體在D-對(duì)羥基苯甘氨酸生產(chǎn)中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求2所述的D-氨甲酰水解酶突變體的編碼基因在D-對(duì)羥基苯甘氨酸生 產(chǎn)中的應(yīng)用。

11.如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于，將如權(quán)利要求2所述的DNA序列克隆 入宿主細(xì)胞，并將該宿主細(xì)胞的發(fā)酵菌體用于D-對(duì)羥基苯甘氨酸的生產(chǎn)。

12.如權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于，所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌。

13.如權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其特征在于，所述大腸桿菌是大腸桿菌E.coli?DH10B。

14.如權(quán)利要求5所述的重組質(zhì)粒在D-對(duì)羥基苯甘氨酸生產(chǎn)中的應(yīng)用。

15.如權(quán)利要求6所述的基因工程菌在D-對(duì)羥基苯甘氨酸生產(chǎn)中的應(yīng)用。