[發明專利]用于豬瘟病毒實時熒光定量RT－PCR檢測的探針、引物及試劑盒有效
| 申請號： | 200810031827.3 | 申請日： | 2008-07-18 |
| 公開（公告）號： | CN101348837A | 公開（公告）日： | 2009-01-21 |
| 發明（設計）人： | 黃萍;朱中武;龍新平;黃志強;唐連飛;魯杏華;黃輝;胡宇東 | 申請（專利權）人： | 黃萍 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 長沙正奇專利事務所有限責任公司 | 代理人： | 盧宏 |
| 地址： | 410004湖南省*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 豬瘟 病毒 實時 熒光 定量 rt pcr 檢測 探針 引物 試劑盒 | ||
1.一種用于豬瘟病毒實時熒光定量RT-PCR檢測的試劑盒，包括探針和引物對，其中探針的序列為5’-tgatgggggtacgacctgatagggt-3’，探針的5’端和3’端分別采用熒光基團FAM和TAMRA進行修飾；
引物對序列為5’?-gacacaagcgcaggcaatag-3’和5’?-agtgggttccaggartacat-3’。
2.一種用于豬瘟病毒實時熒光定量RT-PCR檢測的試劑盒，其特征在于該試劑盒是由下列試劑所組成：
1)陽性標準品：采用人工合成的含有目的檢測基因的RNA作為標準樣品，共4瓶，300μl/瓶，-20℃冷凍保存，標準品1：107拷貝/5μl，標準品2：105拷貝/5μl，標準品3：103拷貝/5μl，標準品4：101拷貝/5μl；
2)陰性對照：采用無豬瘟病毒感染豬組織，按1∶5倍體積加入0.1％DEPC水，于組織勻漿器中充分研磨，然后3500rpm離心20min，取上清液提取RNA，溶解于DEPC水，分裝成300μl/瓶，-20℃冷凍保存備用；
3)0.1％DEPC水：在去離子水中加入0.1％焦碳酸二乙酯，室溫下過夜處理，15磅30分鐘，2×10ml/瓶；
4)Trizol裂解液：50ml/瓶，棕色瓶分裝，4℃保存備用；
5)RT-PCR反應液：每個反應包括5×PCR?buffer?5.0μl、10mmol?dNTPs?0.5μl、25mmol?MgCl2?2.0μl以及權利要求1所述的引物各0.5μl，共8.5μl，50個反應體系共計425μl；
6)反應酶：每個反應體系包括Reverse?Transcriptase?0.2μl、Taq?DNA聚合酶0.5μl，含量為3U/μl，共0.7μl，50個反應體系共計35μl，-20℃冷凍保存備用；
7)含有權利要求1所述的探針序列的溶液：探針序列用0.1％DEPC水稀釋，濃度為10μmol/L，每個反應體系0.5μl，50個反應體系共計25μl，-20℃冷凍保存備用。?
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