[發明專利]一種共表達人源谷氨酸脫羧酶和細胞因子的重組病毒

無效

• 申請號: 200810028196.X
• 申請日: 2008-05-21
• 公開（公告）號: CN101586096A
• 公開（公告）日: 2009-11-25
• 發明（設計）人: 王尚武;朱雅南;徐評議
• 申請（專利權）人: 王尚武;朱雅南;徐評議
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/60;C12N15/12;C12N15/62;C12N15/10;A61K38/17;A61K48/00;A61P25/00;A61P25/16
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• 代理人: 暫無信息

1、一種共表達人源谷氨酸脫梭酶(GAD，下同)和人細胞因子的重組病毒， 尤其是共表達人源GAD65和膠質細胞源性神經營養因子(GDNF，下同)的 重組腺相關病毒(AAV)，其主要特征在于，重組病毒含有共表達人GAD65 和人細胞因子的表達盒結構，所述表達盒結構由pCMV啟動子、β-珠蛋白 內含子、人源GAD、內部核糖體結合位點(IRES，下同)、人源細胞因子和 人生長激素多聚腺嘌呤信號組成。

2、根據權利要求1，所述的重組病毒，優選共表達人源GAD65和膠質細胞 源性神經營養因子(GDNF，下同)的重組腺相關病毒(AAV)，其特征在于， 構建的表達盒結構如下：

a、pCMV啟動子位于β-珠蛋白內含子的上游、β-珠蛋白內含子在其C- 末端以內切酶BamH1拼接于人GAD65基因的N-末端；

b、人GAD65基因的C-末端以內切酶Xbal1拼接于IRES片段的N-末端；

c、IRES片段的C-末端以內切酶Smal1拼接于人GDNF基因的N-末端；

d、人GDNF基因的C-末端以內切酶Bgl11拼接于人生長激素多聚腺嘌 呤信號片段的上游。

3、根據權利要求1，所述的重組病毒，尤其是重組腺相關病毒所共表達的 人源GAD65和GDNF基因的核苷酸及其編碼氨基酸序列：

a、人源GAD65為親本源于人的基因、為編碼GAD65基因全長氨基酸的核 苷酸序列；

b、人源GDNF為親本源于人的基因、為編碼成熟型GDNF氨基酸的核苷酸 序列，且其N-未端融合了由人白細胞介素-2的20個氨基酸構成的分 泌先導序列，替代了GDNF前蛋白的第一個氨基酸到第五十八個氨基 酸序列，其C末端氨基酸序列不變。

4、根據權利要求1，所述的重組病毒，尤其是重組腺相關病毒(AAV)含有 共表達人源GAD65和人GDNF細胞因子基因組合的表達盒結構，這種表達盒 結構所表達的基因組合可以是GAD和其他神經保護、促神經細胞再生、防 止細胞凋亡功能的細胞因子，如轉錄因子Nurr1和pitx3、中腦星狀細胞 源性神經營養因子(MANF)、CDNG、Neurturin(NTN)和BDNF等基因中的一 種所形成的基因組合；也包括了GAD和抗氧化、抗自由基的基因組合，如 SOD1；還可以是GAD與多巴胺合成相關的細胞因子酪氨酸水解酶(TH)基因 或GTP環水解酶基因中的一種所形成的基因組合的共表達。

5、根據權利要求1和權利要求4，重組病毒，優選重組腺相關病毒(AAV) 所共表達的基因組合，這種基因組合既可是本發明所敘述的表達盒結構， 即由一個啟動子驅動經內部核糖體結合位點IRES連接所述的共表達人源谷 氨酸脫梭酶GAD和上述細胞因子共表達的表達盒結構、也可以是在同一重 組病毒結構中由二個相同或不相同啟動子分別驅動上述基因組合的基因表 達，這些啟動子既可以是源于病毒的啟動子，也可以是源自于人的基因啟 動子。

6、根據權利要求1，所述的重組病毒不僅僅限于AAV病毒，也包括了應用 其他病毒，如腺病毒、慢病毒、泡疹病毒和逆轉錄病毒作為載體所構建的 共表達GAD和上述細胞因子的重組病毒。