[發(fā)明專利]皖南尖吻蝮蛇蛇毒蛋白組分、提取方法及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810024829.X
• 申請日: 2008-05-07
• 公開（公告）號: CN101367871A
• 公開（公告）日: 2009-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 芮景;吉兆寧;謝海棠;張正明;陳冬云;張曄
• 申請（專利權(quán)）人: 芮景
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/17;A61P35/00;A61P37/00
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 徐暉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于蛇毒蛋白組分、提取方法及其應(yīng)用，特別屬于皖南尖吻蝮蛇蛇毒蛋白組分、提取方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

蛇毒是由蛇毒腺分泌的一種天然毒蛋白，含有多種蛋白質(zhì)、酶、多肽和其它小分子物質(zhì)，具有廣泛的生物活性。我國古代醫(yī)學(xué)著作如西漢《神農(nóng)本草經(jīng)》、唐代《本草拾遺》、明代《本草綱目》中均有利用蛇毒“以毒攻毒”治療疑難雜癥的記載，認(rèn)為蛇毒可以祛風(fēng)燥濕、通絡(luò)活血，治療風(fēng)濕麻痹、四肢麻木、惡瘡等病癥。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對蛇毒的臨床作用研究主要集中在蛇毒各組分的生物學(xué)特點(diǎn)上。研究發(fā)現(xiàn)，蛇毒組分具有抗凝、抗腫瘤、止血、鎮(zhèn)痛等作用。

蛇毒中以蝮蛇和蝰蛇蛇毒中分離出的活性成分對凝血及血小板聚集系統(tǒng)最為明顯。如：凝血酶樣多肽、α-纖維蛋白原酶、血小板聚集誘導(dǎo)劑、血小板聚集拮抗劑，纖維蛋白原酶受體拮抗劑、金屬蛋白酶、解離素等。這些活性成分廣泛影響血液的凝固和血小板的粘附、聚集與釋放。早在六十年代，國外學(xué)者就已經(jīng)從蝮蛇毒中分離出類凝血酶物質(zhì)，分別用于治療血栓癥和出血癥，如：從馬來西亞紅口蝮蛇中提取的安克洛酶(ancrod)；我國的郝文學(xué)等從江浙蝮蛇中提取的蛇毒抗栓酶(svate)，在臨床上證明療效良好，用于治療血栓性疾病。

而蛇毒用于腫瘤的治療正日益成為研究的的熱點(diǎn)，蛇毒中已確認(rèn)的可抑制腫瘤生長的成分有抑制腫瘤細(xì)胞粘附和腫瘤血管生成的解離素、直接作用于癌細(xì)胞膜的細(xì)胞毒素、一些蛇毒因子和酶類等。蛇毒抗腫瘤作用主要是通過體外實(shí)驗(yàn)和動物移植瘤實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的。趙蓉等應(yīng)用9種蛇毒：眼鏡王蛇、眼鏡蛇、金環(huán)蛇、銀環(huán)蛇、青環(huán)海蛇、蝮蛇、尖吻蛇、竹葉青及圓斑蝰蛇的粗毒對多種人實(shí)體瘤細(xì)胞株，包括子宮頸癌細(xì)胞株(HeLa)、鼻咽癌細(xì)胞株(CNE)、肝癌細(xì)胞株(SMC)、胃癌細(xì)胞株(MGC80-3)等進(jìn)行了直接毒性作用實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明眼鏡蛇毒對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用最強(qiáng)，對SMC的殺傷濃度為50ug/ml，對HeLa、CNE、MGC80-3的殺傷濃度僅為5ug/ml。胃癌和鼻咽癌細(xì)胞株對多種蛇毒呈較高的敏感性。隨著蛇毒作用時間的延長對各種腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用更為明顯。有少數(shù)蛇毒已應(yīng)用于臨床，Cura?JE等從響尾蛇毒中提取的細(xì)胞毒素-復(fù)合響尾蛇毒素(cytotoxic?PLA(2)，NSC-624244)，目前正進(jìn)行難治性實(shí)體瘤的一期臨床實(shí)驗(yàn)。該藥對多種類型的腫瘤轉(zhuǎn)移均有治療作用，能有效抑制癌癥發(fā)展，延長患者生命，但有部分患者出現(xiàn)眼球震顫、流涎等毒副作用。賈建華使用蝮蛇毒制成的蛇毒膠囊制劑結(jié)合中醫(yī)辯證治療27例臨床分期為III-IV期的中、晚期原發(fā)性肝癌患者，治療結(jié)果卡氏評分增加率70.4％，穩(wěn)定率11.1％，下降率18.5％，總有效率達(dá)81.5％。

原發(fā)性肝癌惡性程度高，大多數(shù)患者就診時已失去手術(shù)治療的機(jī)會，化療成為其最主要的治療方法，常用的化療藥物有細(xì)胞周期非特異性藥物阿霉素，和細(xì)胞周期特異性藥物氟尿嘧啶等。蛇毒用于治療肝癌的研究已多見報(bào)導(dǎo)，鄒菁等研究表明，蛇毒復(fù)合酶對人肝癌細(xì)胞有極強(qiáng)的抑瘤作用，培養(yǎng)至8h抑瘤率已達(dá)79.5％，并隨培養(yǎng)時間的延長，抑瘤率增高，120h抑瘤率達(dá)94.5％。在臨床介入治療肝癌前利用蛇毒復(fù)合酶配合治療，可能有助于加強(qiáng)氟尿嘧啶和阿霉素對S期人肝癌的抑殺，起協(xié)同增效作用。劉慰等將中華眼鏡蛇毒組分FC與經(jīng)典肝動脈插管栓塞/灌注化療(TACE)藥進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)FC選擇性作用于肝癌細(xì)胞，在有效濃度下對正常組織保持低毒性，對肝癌細(xì)胞的毒性選擇作用強(qiáng)于5-FU。