[發明專利]皖南尖吻蝮蛇蛇毒蛋白組分、提取方法及其應用

無效

• 申請號: 200810024829.X
• 申請日: 2008-05-07
• 公開（公告）號: CN101367871A
• 公開（公告）日: 2009-02-18
• 發明（設計）人: 芮景;吉兆寧;謝海棠;張正明;陳冬云;張曄
• 申請（專利權）人: 芮景
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/17;A61P35/00;A61P37/00
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司
• 代理人: 徐暉

1.一種含有皖南尖吻蝮蛇蛇毒抗凝蛋白組分的提取物，包括分子量分別為25KDa、30KDa、50KDa的蛇毒蛋白，所述的蛇毒抗凝蛋白組分通過以下方法提?。?/p>

a)陰離子層析步驟：

將皖南尖吻蝮蛇毒粗毒溶于pH8.0±0.5的0.01±0.005mol/L?Tris-Hcl溶液中，6000±1000rpm離心，取上清液適量上DEAE瓊脂糖凝膠FF柱，用pH8.0±0.5的0.01±0.005mol/L?Tris-Hcl溶液與含有0.5±0.05mol/L?NaCl的0.01±0.005mol/L?Tris-Hcl溶液進行梯度洗脫，溫度為0℃～10℃，流速為0.5±0.1ml/min，5-20min收集一管，用紫外檢測儀進行檢測，記錄層析圖譜，根據圖譜收集各峰洗脫液，測定各峰的抗凝活性，選取抗凝時間延長最明顯的峰，收集此峰各管洗脫液，裝入透析袋，脫鹽濃縮得到蛇毒蛋白1，皖南尖吻蝮蛇毒粗毒與DEAE瓊脂糖凝膠FF的g/ml比為1∶15-25；

b)陽離子層析步驟：

將蛇毒蛋白1于6000±1000rpm離心，取上清液適量上SP瓊脂糖凝膠FF柱，用pH6.7±0.5的含有0.1±0.05mol/L?NaCl的0.05±0.005mol/L?NaH₂PO₄300ml的溶液與含有0.5±0.05mol/L?NaCl的0.05±0.005mol/L?NaH₂P0₄溶液進行梯度洗脫，溫度為0℃～10℃，流速為0.5±0.1ml/min，5-20min收集一管，紫外檢測儀進行檢測，記錄層析圖譜，根據圖譜收集各峰洗脫液，測定各峰的抗凝活性，選取抗凝時間延長最明顯的峰，收集此峰各管洗脫液，裝入透析袋，脫鹽濃縮得到蛇毒蛋白2，蛇毒蛋白1與SP瓊脂糖凝膠FF的體積比為1∶50-80；

c)分子篩層析步驟

將蛇毒蛋白2于6000±1000rpm離心，取上清液適量上Sephadex?G75柱，用生理鹽水進行洗脫，溫度為0℃～10℃，流速為0.5±0.1ml/min，5-20min收集一管，用紫外檢測儀進行檢測，記錄層析圖譜，根據圖譜收集各峰洗脫液，測定各峰的抗凝活性，選取抗凝時間延長最明顯的峰，收集此峰各管洗脫液，裝入透析袋，脫鹽濃縮得到蛇毒抗凝蛋白組分，蛇毒蛋白2與Sephadex?G75干粉的ml/g比為1∶40-60。

2.根據權利要求1所述的含有皖南尖吻蝮蛇蛇毒抗凝蛋白組分的提取物，其特征在于：所述的提取物的蛋白含量為0.6±0.03mg/ml。

3.權利要求1所述的含有皖南尖吻蝮蛇蛇毒抗凝蛋白組分的提取物在制備抗肝癌藥物的應用。