[發(fā)明專利]農(nóng)作物秸稈生物轉(zhuǎn)化制備琥珀酸工藝

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810019401.6
• 申請日: 2008-01-04
• 公開（公告）號: CN101215584A
• 公開（公告）日: 2008-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姜紹通;潘麗軍;李興江;陳曉暉
• 申請（專利權(quán)）人: 合肥工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12P7/46
• 分類號: C12P7/46;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 合肥金安專利事務(wù)所
• 代理人: 金惠貞

1.農(nóng)作物秸稈生物轉(zhuǎn)化制備琥珀酸工藝，其特征在于：

A、農(nóng)作物秸稈的稀堿液預(yù)處理：

取1000g粉碎40目的農(nóng)作物秸稈添加于含5L水的反應(yīng)釜中，同時添加分析純氫氧化鈣1.85g，控制pH為12.0，加熱至95℃，攪拌維持20min，得水解液；

B、超聲處理：

將水解液置于溫度95℃、功率50赫茲條件下超聲處理10min；

C、酸中和處理：

在超聲處理后水解液中，添加2.50g濃度為98％的硫酸，所得中和液體pH至中性，分離固體成分及硫酸鈣沉淀，得中和處理液；

D、酶解處理：

在中和處理液中添加酶活力為15U/mg的液體纖維素酶5.0g，維持溫度60℃，攪拌酶解60min，所得酶解處理液中五、六碳混合糖濃度約70g/L；

E、培養(yǎng)基制備：

在上述酶解處理液中添加營養(yǎng)物質(zhì)后得培養(yǎng)基，將5L培養(yǎng)基泵入7L規(guī)模的厭氧發(fā)酵罐內(nèi)，直接121℃在線滅菌20min；各種營養(yǎng)物質(zhì)重量比如下：六碳糖葡萄糖46.2g/L，五碳糖木糖23.7g/L，酵母浸粉1.5g/L，胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)0.5g/L，玉米漿(CSL)2.0g/L，磷酸二氫鈉(NaH₂PO₄·2H₂O)0.5g/L，磷酸氫二鈉(Na₂HPO₄·12H₂O)00.2g/L，氯化鈉(NaCl)0.3g/L，氯化鎂(MgCl₂·6H₂O)0.05g/L；

F、接種發(fā)酵：

將250mL產(chǎn)琥珀酸放線桿菌種子培養(yǎng)液接入發(fā)酵罐中，進(jìn)行厭氧發(fā)酵，控制厭氧氣體CO₂和H₂混合氣流速為0.05L·min^-1·L^-1，攪拌轉(zhuǎn)速為120r/min，培養(yǎng)溫度為37℃，培養(yǎng)30h，并通過流加無菌濃氫氧化鈣乳液來控制發(fā)酵液pH5.5-pH6.0；產(chǎn)物琥珀酸以鈣鹽的形式存在，琥珀酸濃度達(dá)到75g/L，5L發(fā)酵液中制備獲得350g琥珀酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述農(nóng)作物秸稈生物轉(zhuǎn)化制備琥珀酸工藝，其特征在于：發(fā)酵菌種為產(chǎn)琥珀酸放線桿菌(Actinobacillus?succinogenes?ATCC55618)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述農(nóng)作物秸稈生物轉(zhuǎn)化制備琥珀酸工藝，其特征在于：所述農(nóng)作物秸稈為小麥秸稈或水稻秸稈或玉米秸稈。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述農(nóng)作物秸稈生物轉(zhuǎn)化制備琥珀酸工藝，其特征在于：秸稈水解后葡萄糖與木糖質(zhì)量比約為2∶1，分別為46.2g/L及23.7g/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述農(nóng)作物秸稈生物轉(zhuǎn)化制備琥珀酸工藝，其特征在于：通過控制CO₂和H₂混合氣流速0.05L·min^-1·L^-1時，其中CO₂和H₂的體積比為2∶1。