[發明專利]檢測痕量環境內分泌干擾物的分子印跡膜電極制備方法及檢測方法

無效

• 申請號: 200810016487.7
• 申請日: 2008-06-06
• 公開（公告）號: CN101294926A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發明（設計）人: 黃加棟;于京華;裴梅山;汪世華;張玉璘;王元秀;張瑾;葛慎光;李芳;張麗娜;朱元娜;顏梅;盧燕;李冬梅;孫旦子;席志芳
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所
• 代理人: 李桂存

技術領域

本發明涉及環境污染物檢測技術領域，更具體地說是一種檢測痕量環境內分泌干擾物的分子印跡膜電極制備方法，本發明還涉及采用所述的分子印跡膜電極檢測環境樣本中痕量環境內分泌干擾物的方法。

背景技術

環境內分泌干擾物(Endocrine?Disrupting?Chemicals，簡稱EDCs)是指一類干擾生物體的正常行為及與生殖、發育相關的正常激素的合成、貯存、分泌、體內運輸、結合、清除等過程的外來物質。環境內分泌干擾物分為以下幾類：多氯聯苯類、二惡英類、烷基酚類、鄰苯二甲酸二丁酯類、金屬類、有機氯化合物環境激素類、植物雌激素類、真菌雌激素類。

目前EDCs已成為迫切需要治理的新一代環境污染物，微量的EDCs即可對正常激素作用產生影響，干擾內分泌機能，引起哺乳動物及人類的生殖障礙、發育異常及某些病理性損傷。這類物質不僅存在于工業廢水、廢氣和生活污水中，在農產品中也可能存在。如果EDCs殘留不能得的及時、準確地檢測，它們就可能進入機體，并在體內直接或間接影響正常的激素代謝，給人類健康帶來嚴重的危害。

建立一種高靈敏度和特異性的快速篩檢EDCs殘留的方法，便成為當前該研究領域亟需解決的問題之一。目前已有的EDCs檢測或篩檢方法主要包括體內試驗、體外試驗、生物標志物檢測及儀器監測方法等。但是這些檢測或篩檢方法存在不足：

1.體內試驗常采用子宮增重試驗和子宮鈣結合蛋白CaBP-9k?mRNA表達檢測和蛋白分析，該方法反應敏感具有專一性，但是其成本高，靈敏度低，不適于大規模的快速篩檢；

2.體外試驗主要有E-Screen法、受體競爭試驗等，試驗本身的特異性較差，容易出現假陽性結果；

3.借助于HPLC或LC-MS聯用技術等大型精密儀器建立起來的EDCs儀器檢測方法，對EDCs的檢測雖說具有很高的靈敏度，但是該方法不能一次就鑒定出分析物的結構，往往還需要用GC-MS確認結構，技術成本較高，傳統方法所需的時間一般都較長，有的甚至長達幾個小時，操作復雜，不能用于現場的快速檢測。

4.以上幾種方法對于EDCs的檢測和分析，一般都存在檢測靈敏度低、成本高、結果假陽性、檢測過程復雜、不適于現場快速檢測等缺點，因此不能滿足實際檢測的需要。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供了一種檢測速度快、靈敏度高的檢測痕量EDCs的分子印跡膜電極及檢測EDCs的方法。

為了解決上述技術問題，本發明是通過以下措施來實現的：一種檢測痕量EDCs的分子印跡膜電極制備方法，其特征是包括以下步驟：

(1)選擇能與EDCs合成分子印跡聚合物(Molecularly?Imprinted?Polymers，簡稱MIPs)的功能單體；

(2)按一定摩爾比將EDCs的模板分子、功能單體、交聯劑、致孔劑、引發劑和有機溶劑混合均勻制成MIPs溶液；

(3)利用納米材料，按照現有方法制備出納米材料溶液；

(4)利用電極表面修飾技術，將納米材料和分子印跡聚合物MIPs修飾到傳感器電極表面上。

本發明所述EDCs模板分子、功能單體、交聯劑、致孔劑、引發劑和有機溶劑的摩爾比為0.1～1∶1∶0.5～6∶35～65∶0.05～0.15∶2.0～25。

本發明所述納米材料和分子印跡聚合物MIPs修飾到傳感器電極表面包括以下步驟：

(1)將工作電極表面用0.05μm的氧化鋁粉打磨，超聲波清洗，再分別用1mol/LHNO₃，1mol/L?NaOH清洗，然后用雙蒸水徹底清洗數次，吹干；

(2)將制備的納米材料溶液超聲處理20-60min，得到分散的納米溶液；

(3)將工作電極表面浸泡于分散的納米溶液中5-10分鐘，取出晾干；

(4)將步驟(3)中晾干的工作電極再浸泡于MIPs溶液中5-10分鐘，然后將工作電極取出用洗脫劑洗脫20-30分鐘，在室溫下干燥5-10分鐘；

(5)重復步驟(3)和步驟(4)過程4-7次，制得所述分子印跡膜電極。

本發明還包括以下步驟：

將分子印跡膜電極浸入pH6.8-7.5緩沖液中，保存在4℃冰箱中，24h后使用。

本發明所述納米材料溶液為碳納米管溶液、納米金溶液或納米鉑溶液。

本發明所述洗脫劑為乙腈、水、甲醇-乙酸或乙腈-乙酸。

本發明所述緩沖液為檸檬酸-磷酸。