[發明專利]REIC/Dkk-3基因的部分片段和包含所述部分片段的癌癥治療劑

有效

• 申請號: 200780043463.4
• 申請日: 2007-10-24
• 公開（公告）號: CN101541960A
• 公開（公告）日: 2009-09-23
• 發明（設計）人: 公文裕巳;許南浩;阪口政清;那須保友;費爾南多·吉耶爾莫·阿瓦蘇亞·卡韋薩斯
• 申請（專利權）人: 公文裕巳;許南浩;阪口政清;那須保友;費爾南多·吉耶爾莫·阿瓦蘇亞·卡韋薩斯
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;A61K31/711;A61K38/00;A61K48/00;A61P35/00;A61P43/00;C07K4/12;C07K14/47
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司
• 代理人: 丁香蘭;譚 輝

技術領域

本發明涉及使用腫瘤抑制基因(即REIC/Dkk-3基因片段)對癌細胞凋 亡進行的誘導、包含REIC/Dkk-3基因片段的癌細胞凋亡誘導劑、和包含 所述凋亡誘導劑的癌癥治療劑。

發明背景

癌細胞的選擇性去除在癌癥治療中起著關鍵的作用。不同類型的基 因突變在腫瘤發生和癌癥發展期間在細胞內出現(Vogelstein，B.等，Trends Genet?9，138-41，1993)，且這些突變可以作為癌癥基因療法的靶標。當給 定類型的基因過表達時，這些基因表現出選擇性殺死癌細胞的效果。所 述基因的代表性實例包括p53(Chen，P.L.等，Science?250，1576-80，1990； Fujiwara，T.等，J.Natl.Cancer?Inst.，86，1458-62，1994；Nielsen，L.L.等， Cancer?Gene?Ther.，4，129-38，1997)和mda-7(Fisher，P.B.等，Cancer?Biol. Ther.，2，S23-37，2003)，且所述基因被稱作癌癥抑制基因。

同時，已知REIC/Dkk-3基因與細胞永生化有關，并且據報道，在癌 細胞中該基因的表達受到抑制(WO?01/038523，Tsuji，T.等，Biochem. Biophys.Res.Commun.，268，20-4，2000；Tsuji，T.等，Biochem.Biophys.Res. Commun.，289，257-63，2001；Nozaki，I.等，Int.J.Oncol.，19，117-21，2001； 和Kurose，K.等，J.Urol.，171，1314-8，2004)。

REIC/Dkk-3基因是Dkk家族的一員，并且表明該基因通過Wnt受 體而抑制Wnt信號傳輸(Bafico，A.等，Nat.Cell?Biol.，3，683-6，2001；和 Hoang，B.H.等，Cancer?Res.，64，2734-9，2004)。據報道，所述Wnt基因 在諸如細胞生長、分化和癌化等重要生物學條件中起著多重作用(Moon， R.T.等，Science?296，1644-6，2002)。因此也認為所述Dkk家族(目前已知 在人類中存在4種基因)在細胞生長、分化和癌化中起著關鍵的作用， 盡管其大多數功能仍然未知。

目前，關于內質網應激的研究已經得到了發展。體內合成的分泌蛋 白被轉移到內質網并由多種分子伴侶或折疊酶進行有效的折疊。然而， 折疊并非總能充分地進行，在這種情況下，具有較高級結構的異常蛋白 在內質網內凝集，從而誘導內質網應激(D.Thomas?Rutkowski等，TRENDS in?Cell?Biology第14卷，第1期，第20-28月，2004年1月)。據報道，細 胞可能由于由所述內質網應激誘導的凋亡而死亡(Mori?K.，Traffic，4， 519-528，2003)。

發明內容

本發明提供了包含REIC/Dkk-3基因片段的癌細胞凋亡誘導劑和包 含所述凋亡誘導劑的癌癥治療劑。

到現在為止，本發明人已證明，通過腺病毒強制表達REIC/Dkk-3 會誘導諸如前列腺癌細胞等癌細胞的凋亡，正常細胞在同一條件下不會 受到明顯影響，且在動物移植模型中會觀察到治療癌癥的顯著效果(日 本專利第3813872號和WO?2006/098074)。此外，本發明人已進行了關 于表現強烈的凋亡誘導效果的REIC/Dkk-3蛋白區域和表現凋亡誘導效果 的機理的集中研究。

因此，本發明人發現了以下幾點。

(1)當將REIC/Dkk-3基因導入CHO細胞以強制表達REIC/Dkk-3且 對所述癌細胞施用在培養基中分泌的REIC/Dkk-3蛋白時，沒有觀察到凋 亡。

(2)在通過REIC/Dkk-3基因的強制表達使癌細胞凋亡時，JNK被激 活且JNK抑制劑抑制了對凋亡的誘導。JNK通過各種因素激活，已知內 質網應激是一個重要因素。

(3)由內質網內異常蛋白凝集引起的應激誘導的CHOP和BIP基因 伴隨REIC/Dkk-3基因的強制表達而被誘導。

(4)當使促進蛋白正常構象的構建的Hsp蛋白誘導劑作用于癌細胞 時，所述癌細胞沒有發生凋亡。相反，當允許Hsp蛋白抑制劑作用于正 常細胞時，在所述正常細胞內的凋亡受到誘導，所述正常細胞內通常不 會通過REIC/Dkk-3基因的強制表達而發生凋亡。