[發明專利]經修飾的β-內酰胺酶及其制備方法

無效

• 申請號: 200780023477.X
• 申請日: 2007-06-19
• 公開（公告）號: CN101484577A
• 公開（公告）日: 2009-07-15
• 發明（設計）人: 蘇珊娜·卡里艾寧;尼娜·維克斯特蘭德;佩爾蒂·科斯基
• 申請（專利權）人: IPSAT治療公司
• 主分類號: C12N9/86
• 分類號: C12N9/86;C12N1/21;A61K38/46
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉曉東;彭鯤鵬

1.具有如下通式的經修飾金屬β-內酰胺酶蛋白：

NH₂-K-T-E-ABL-COOH

其中

K代表賴氨酸

T代表蘇氨酸

E代表谷氨酸，以及

ΔBL代表已在氨基末端被截短的金屬β-內酰胺酶蛋白，從而保留了所述蛋白質預測二級結構中第一α-螺旋之前的四個β-鏈。

2.包含編碼權利要求1所述的金屬β-內酰胺酶蛋白之核苷酸序列的經分離核苷酸分子。

3.權利要求2所述的核苷酸分子，其包含SEQ?ID?NO：2的94-756位連續核苷酸。

4.含有權利要求2所述的核苷酸分子的表達載體。

5.能夠表達由權利要求2所述的核苷酸分子所編碼的金屬β-內酰胺酶蛋白的宿主細胞。

6.權利要求5所述的宿主細胞，其分泌所述金屬β-內酰胺酶蛋白。

7.權利要求5或6所述的宿主細胞，其為芽孢桿菌屬物種(Bacillusspp.)，特別是地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)或枯草芽孢桿菌(B.subtilis)。

8.具有如下通式的經修飾金屬β-內酰胺酶蛋白：

NH₂-E-ΔBL-COOH

其中

E代表谷氨酸，以及

ΔBL代表已在氨基末端被截短的金屬β-內酰胺酶蛋白，從而保留了所述蛋白質預測二級結構中第一α-螺旋之前的四個β-鏈。

9.權利要求8所述的金屬β-內酰胺酶蛋白，其屬于金屬β-內酰胺酶的B1亞組。

10.權利要求9所述的金屬β-內酰胺酶蛋白，其中經截短的β-內酰胺酶來源于芽孢桿菌屬，特別是來源于蠟狀芽孢桿菌(B.cereus)。

11.權利要求10所述的金屬β-內酰胺酶，其中E-ΔBL源自缺失成熟金屬β-內酰胺酶的前11個氨基末端氨基酸。

12.權利要求9所述的金屬β-內酰胺酶蛋白，其中E-ΔBL序列與SEQ?ID?NO：3的6-221位連續氨基酸殘基所示氨基酸序列具有至少80％的同一性。

13.權利要求9所述的金屬β-內酰胺酶蛋白，其中E-ΔBL序列是具有SEQ?ID?NO：1所示序列的金屬β-內酰胺酶的截短形式，或β-內酰胺酶活性變體或其片段。

14.權利要求9所述的金屬β-內酰胺酶蛋白，其中E-ΔBL源自在氨基酸KN和E之間截短金屬β-內酰胺酶。

15.一種制備經修飾金屬β-內酰胺酶蛋白的方法，該方法包括在使具有如下通式的金屬β-內酰胺酶能夠表達的條件下培養權利要求5的宿主細胞：

NH₂-K-T-E-ABL-COOH，

其中

K代表賴氨酸

T代表蘇氨酸

E代表谷氨酸，以及

ΔBL代表已在氨基末端被截短的金屬β-內酰胺酶蛋白，從而保留了所述蛋白質預測二級結構中第一α-螺旋之前的四個β-鏈，

并進行翻譯后修飾，以得到具有如下通式的金屬β-內酰胺酶：

NH₂-E-ΔBL-COOH，

其中E和ΔBL如上定義，以及

任選地，分離和純化所獲得的翻譯后修飾蛋白質。

16.權利要求15所述的方法，其中所述金屬β-內酰胺酶蛋白表達為包含信號序列的形式，由此該蛋白質可從宿主細胞分泌出來。

17.權利要求15或16所述的方法，其中所述蛋白質在芽孢桿菌屬物種、特別是地衣芽孢桿菌或枯草芽孢桿菌中產生。

18.包含權利要求8的經修飾金屬β-內酰胺酶的藥物組合物。

19.權利要求8所述的經修飾金屬β-內酰胺酶用作藥物。

20.權利要求8所述的經修飾金屬β-內酰胺酶用于制備消除β-內酰胺類抗生素在腸道中引起不良反應之藥劑的用途。