[發明專利]一種微囊藻毒素分離純化的方法

無效

• 申請號: 200710190610.2
• 申請日: 2007-11-27
• 公開（公告）號: CN101168561A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 虞銳鵬;陶冠軍;秦昉;王中嬋;貢小清
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C07K7/52;C07K1/22;C07K4/08
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種微囊藻毒素分離純化的方法，其特征在于，將有毒藍藻水華干粉用乙酸水溶液為提取劑，采用大孔吸附樹脂D101作為分離純化材料，通過兩次過大孔吸附樹脂層析柱分離，洗脫液為不同濃度的乙醇-水溶液，得到微囊藻毒素-RR、微囊藻毒素-YR和微囊藻毒素-LR的乙醇水溶液；步驟為：

A.稱取有毒藍藻水華干粉，加入其重量20-30倍的5％的乙酸溶液，連續攪拌40-50min，用6000g離心10min，取上清液；沉淀按上述提取步驟重復提取一次，合并兩次提取上清，用0.45微米的濾膜過濾后旋轉蒸發，得微囊藻毒素乙酸提取濃縮液備用，濃縮液的重量為原料藍藻水華干粉重量的6-10倍；

B.大孔吸附樹脂D101層析柱，10×100cm，酒精浸泡樹脂24h后，依次用4％HCl、2％HCl各浸泡3-5h，去離子水洗成中性，將A步驟中的提取濃縮液調pH2.8-3.2后過柱，然后依次用為提取濃縮液一半體積的水、一半體積的15％乙醇淋洗，再依次用與提取濃縮液等體積的30％乙醇、40％乙醇、50％乙醇洗脫，收集洗脫液；

C.將步驟B中獲得的30％乙醇洗脫液旋轉蒸發去乙醇后，再用上述同樣條件新處理的大孔吸附樹脂進行分離，過柱，然后用與步驟B同樣體積的15％乙醇淋洗，再用30％乙醇洗脫，分段收集洗脫液；用HPLC-UV/MS法測定，得到含微囊藻毒素-RR乙醇水溶液；

D.將步驟B中獲得的40％和50％乙醇洗脫液合并，旋轉蒸發去乙醇后，再用上述同樣條件新處理的大孔吸附樹脂進行分離，過柱，然后用與步驟B同樣體積的15％乙醇淋洗，再用40％乙醇洗脫，分段收集洗脫液；用HPLC-UV/MS法測定，分別得到微囊藻毒素-YR乙醇水溶液和微囊藻毒素-LR乙醇水溶液；

E.微囊藻毒素的純度檢測采用HPLC-UV/MS法測定，色譜柱：Symmetry?C18柱，2.1×150mm，3.0μm，柱溫30.0℃；流動相：乙腈-水-甲酸，體積比依次為30∶70∶0.1；流速：0.3ml/min；紫外-檢測器：238nm；液相色譜進樣體積：10μL；質譜條件：采用正電子電離方式，噴霧電壓3.7KV，脫溶溫度：300℃，離子源溫度：120℃，離子能量：1.0v，錐孔電壓：30-60V，掃描范圍：m/z＝400-1200；色譜峰面積歸一化法計算微囊藻毒素純度；由質譜信號判定色譜峰已基本分離。

2.根據權利要求1所述的一種微囊藻毒素分離純化的方法，其特征在于，兩次過大孔吸附樹脂層析柱分離得到純度≥80％的微囊藻毒素-RR、微囊藻毒素-YR和微囊藻毒素-LR乙醇水溶液。