[發(fā)明專利]選擇性封閉腫瘤STAT3的新型溶瘤腺病毒構(gòu)建體的獲得及用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710187842.2
• 申請日: 2007-11-20
• 公開（公告）號: CN101440379A
• 公開（公告）日: 2009-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬丁;周劍峰;王世宣;盧運萍;韓志強(qiáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市奧尼克斯基因技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;A61K48/00;A61K47/42;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種重組腺病毒構(gòu)建體，其技術(shù)特征在于：

該重組腺病毒構(gòu)建體稱為Ad5/ΔE1/ΔADP/ASSTAT3，該構(gòu)建體是在野生型Ad5的基礎(chǔ)上缺失了其第920-946?nt?GAT?CTT?ACC?TGC?CAC?GAG?GCT?GGC?TTT，該序列編碼Ad5E1A蛋白的121至129位氨基酸，同時缺失E3區(qū)位于ADP基因中的第29477-29714nt，在該缺失區(qū)域引入一個ClaI酶切位點；利用該酶切位點反向插入770bp的外源性STAT3?cDNA片段，該片段相當(dāng)于STAT3?mRNA的第960-190nt，其它基因組結(jié)構(gòu)與野生型Ad5完全相同。

2.制備權(quán)利要求1所述的重組腺病毒構(gòu)建體的方法，其特征在于：

用PCR擴(kuò)增定點缺失技術(shù)分別缺失包含腺病毒21nt至5790nt序列的pXC1質(zhì)粒中E1A的編碼區(qū)920-946nt，序列為GAT?CTT?ACC?TGC?CAC?GAG?GCT?GGC?TTT，組成新的載體Δ920-946pXC1，Δ920-946pXC1質(zhì)粒與穿梭載體pBHGE3共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，篩選出表達(dá)E1A突變體功能蛋白的重組腺病毒構(gòu)建體Δ920-946Ad5；采用PCR擴(kuò)增定點缺失技術(shù)缺失Ad5?E3區(qū)29477-29714nt，并在上述缺失區(qū)域引入一個ClaI酶切位點，組成新的載體pCDNA3.1-ΔADP，在ClaI酶切位點處反向插入770bp的外源性STAT3?cDNA片段，該片段相當(dāng)于STAT3?mRNA的第960-190nt，組成新的載體pCDNA3.1-ΔADP/ASSTAT3；提取Δ920-946?Ad5?TP-DNA，用EcoRI酶切，與用EcoRI酶切出的載體pCDNA3.1-ΔADP/ASSTAT3片段共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，篩選出表達(dá)E1A突變體的重組腺病毒構(gòu)建體Ad5/ΔE1/ΔADP/ASSTAT3。

3.權(quán)利要求1所述的重組腺病毒構(gòu)建體在制備用于肺癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、前列腺癌及成骨細(xì)胞瘤治療的藥物中的應(yīng)用。

4.權(quán)利要求1所述的重組腺病毒構(gòu)建體在制備基因治療載體中的用途。