[發明專利]一種用微生物發酵技術生產復合膽紅素鹽的方法

無效

• 申請號: 200710169054.0
• 申請日: 2007-12-28
• 公開（公告）號: CN101469337A
• 公開（公告）日: 2009-07-01
• 發明（設計）人: 胡杰
• 申請（專利權）人: 胡杰
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

所屬技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，用微生物發酵技術生產復合膽紅素鹽的方法。

背景技術

天然牛黃作為傳統名貴中藥材，是中成藥的重要原料。長期以來，藥源緊缺，難以滿足臨床用藥的需要，大量牛黃依賴進口。為此，為解決天然牛黃資源緊缺問題，醫藥專家一直在尋找牛黃的替代品，自1972年國家陸續批準了3個牛黃代用品，即：人工牛黃、培植牛黃和體外培育牛黃。目前作為天然牛黃原料的替代用品，除了培植牛黃外，其他都是在牛體外生產的產品，而醫藥市場也是以在牛體外生產的產品為主。天然牛黃形成的過程是一個生命歷程，天然牛黃的替代用品無論從機理、工藝、成分、結構還是藥效等方面，都試圖與天然牛黃接近。研究表明，無論是膽紅素鈣結石還是膽固醇結石，都與膽汁中膽汁酸鹽減少有關，其膽酸受細菌的影響也是較嚴重的，牛黃中幾乎不存在游離膽酸的吸收峰，而主要是牛磺酸和甘氨酸結合的膽汁酸，游離膽酸不是牛黃的主要成分，更不是成石的原因。體外膽汁中的膽紅素是極不穩定的，極容易被破壞，牛磺膽酸鈉的存在可使膽紅素鈣鹽沉淀顆粒變小，顆粒的聚集程度減小。還有，膽汁中的所有的有機和無機成分是在一個復雜和共生的環境下存在并逐步交織在一起，最終形成特有的復雜成分和結構。而現在上市的體外生產的牛黃代用產品，其原理與天然牛黃形成相背離，其所謂的工藝與天然牛黃的形成過程完全不同，成分中包括膽紅素鹽、膽酸、以及去氧膽酸等的復合膽紅素鹽均是直接加入的，所以實質是化學方法制備的牛黃代用品。所以復合膽紅素鹽的科學合理的制備是牛黃代用品最關鍵的技術和工藝。

現有的天然牛黃代用品中復合膽紅素鹽的制作方法中存在以下不足：一、復合膽紅素鹽中成分的形成與膽汁發酵不同步，不是一個生物生長過程。二、以膽紅素鈣為主要成分的復合膽紅素鹽的形成過程是一個化學反應過程；膽酸類物質是直接添加游離的化學純。三、即使有膽汁的發酵，但其過程與包括以膽紅素鈣為主要成分的復合膽紅素鹽和膽酸類物質形成過程是分離的。四、膽汁中的細菌的生長繁殖不是一個自然的過程，而是運用單一或者幾種篩選出的菌株進行接種發酵。五、現行的牛黃代用品所謂的品質控制是基于其質量標準的型式檢測，所以其滿足的是檢測指標而已。

發明內容

本發明目的旨在提供一種用微生物發酵技術生產復合膽紅素鹽的方法，彌補現有天然牛黃的替代品中制作復合膽紅素鹽關鍵技術的諸多缺陷不足，使其不只是滿足所謂的品質控制是基于其質量標準的檢測指標等型式檢測，而是從機理、工藝、成分、結構、藥效等方面更與天然牛黃接近，使天然牛黃的替代品發揮起應有的作用。

鑒于上述目的得以實現，本發明提供的技術方案如下：

本復合膽紅素鹽的制作方法，是用新鮮牛膽汁與牛黃的相關成分組成發酵底料配方和發酵補料配方，發酵底料在發酵罐開放自然環境下染菌發酵，經過補料分批培養發酵，使復合膽紅素鹽逐步形成，用蒸氣滅菌沉淀、蒸發濃縮、噴霧干燥為成品復合膽紅素鹽。

上述制作工藝中，發酵底料配方為：新鮮牛膽汁500-1000ml、牛磺酸5-10g。其優選配方為：新鮮牛膽汁600ml、牛磺酸5g。新鮮牛膽汁是指新鮮得到或新鮮得到并置于2-4℃冷藏保存的膽汁。

上述制作工藝中，新鮮牛膽汁直接加入牛磺酸組成底料發酵液。

上述制作工藝中，發酵補料配方為：新鮮牛膽汁1000-1500ml、牛磺酸5-10g、膽紅素35-50g、膽酸5-15、去氧膽酸3-8g、氫氧化鈣10-20g、硫酸鋅1-2g、硫酸鎂1-2g。其優選配方為：新鮮牛膽汁1200ml、牛磺酸8g、膽紅素40g、膽酸10、去氧膽酸5g、氫氧化鈣15g、硫酸鋅1g、硫酸鎂1g。

上述制作工藝中，新鮮牛膽汁加入其他補料成分，并加入同比例的蒸餾水充分攪拌后組成補料發酵液。

上述制作工藝中，上述底料發酵液和補料發酵液在不銹鋼的配料罐中完成；發酵在不銹鋼的發酵罐中進行。

上述制作工藝中，將底料發酵液在溫度30-45℃的開放自然環境下染菌并進行發酵，發酵周期為48-72小時，發酵過程在30-60轉/分進行轉動攪拌。其中的細菌包括大腸桿菌、腸球菌但不限于以上細菌范圍。優選溫度為40℃，轉速為60轉/分。

上述制作工藝中，底料發酵后進行兩次間歇地補料發酵；第一次在底料發酵后進行，發酵36-48小時后進行第二次在補料發酵，溫度仍在30-45℃范圍內，發酵過程在30-60轉/分進行轉動攪拌。優選溫度、轉速同上。