[發明專利]一種用于婦科惡性腫瘤早期篩選的基因芯片及其檢測方法

無效

• 申請號: 200710168652.6
• 申請日: 2007-12-07
• 公開（公告）號: CN101230390A
• 公開（公告）日: 2008-07-30
• 發明（設計）人: 陳勇;譚秋萍;朱文婷;張曉雷;王恒松;韓鳳梅
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 武漢金堂專利事務所
• 代理人: 丁齊旭

技術領域

本發明涉及常見婦科惡性腫瘤(乳腺癌、卵巢癌、子宮癌)的早期篩查方法，具體地說是常見婦科惡性腫瘤早期篩查與診斷的基因芯片及其檢測方法。

背景技術

惡性腫瘤(包括肺癌、乳腺癌、結直腸癌、胃癌和宮頸癌等)是嚴重危害人類生命和健康的常見疾病。世界衛生組織統計，全世界每年有490萬新癌癥患者，死亡者可達430萬，每死亡10個人中就有一個死于癌癥。惡性腫瘤是人類三大死因之一，僅次于心、腦血管疾病。

對癌癥的防治除了在病因學上積極做好工作外，主要是“三早”措施，即早期發現、早期診斷、早期治療。目前，對早期惡性腫瘤的治療往往可以取得較好臨床效果，治愈率高，患者的生活質量也因為其手術范圍較小和化、放療時間較短而大為提高。同時，也有利于節省衛生資源，減少醫療支出。因此，癌癥的早期發現、早期診斷及早期治療是降低死亡率及提高生存率的主要策略之一。

癌癥診斷主要是檢測腫瘤標志物，既惡性腫瘤發生發展的新陳代謝產物。腫瘤標志物種類很多，目前發現的已有100多種。臨床上對于腫瘤的早期診斷主要采用腫瘤標志物的檢測，但由于其特異性較差，存在不易對腫瘤患者進行早期診斷，不能在全民中進行普查等缺陷。開發高特異性及高通量惡性腫瘤的基因芯片及其檢測方法將有利于早期診斷、早期治療及全民普查，具有重大的社會效益。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于常見婦科惡性腫瘤早期篩查診斷的特征基因芯片的制備及其檢測方法，使常見婦科惡性腫瘤能夠盡早盡快篩選、確診和治療。

本發明是這樣實現的。用于常見婦科惡性腫瘤早期篩查診斷的寡核苷酸基因芯片制備的主要步驟是：

(1)經大量研究得出：在常見婦科惡性腫瘤患者的血液中癌癥基因表達功能明確且可檢測出的特征基因為：

乳腺癌：LTA(NM_000595)；VEGFA(M27281)；ICAM1(NM_000201)；PRL(NM_000948)；IGF1(NM_000618)；BCL2(NM_000657)；ERBB2(NM_004448)；CXCL12(NM_000609)；HMGA2(NM_003483)；FAS(NM_000043)；TNF(NM_000594)；SYK(NM_003177)；ACP5(NM_001611)；KLK2(NM_005551)；EGFR(NM_005228)；IGFBP3(NM_000598)；

卵巢癌：RASSF1(NM_007182)；CD44(X55150)；

子宮癌：TNF(NM_000594)；PRL(NM_000948)；MDM2(NM_002392)；MMP9(NM_004994)；IL-10(NM_000572)；

(2)根據基因序列號，利用數據庫NCBI，確定上述特征基因的完整序列；

(3)找出與上述常見婦科惡性腫瘤特征基因互補的基因，制備出長約20-50個堿基序列的核酸分子的寡核苷酸片段；

(4)然后進行DNA鏈的化學交聯，通常是官能團修飾的寡核苷酸樣品轉移到經化學處理的活化載體上，使寡核苷酸末端與載體發生專一性共價偶聯。

其中寡核苷酸的末端修飾及載體的表面處理為：載玻片先用3-巰丙基硅烷衍生化、與5’端二硫鍵化合物修飾的寡核苷酸發生巰基置換反應進而交聯。(交聯密度為3×10⁵寡核苷酸/μm²，芯片密度可達20000點/cm²)；

(5)然后沖洗未反應的寡核苷酸探針后，制備出表達有常見婦科惡性腫瘤特征基因的寡核苷酸基因芯片。

常見婦科惡性腫瘤早期篩查診斷的檢測方法，其主要步驟是：

(1)提取出待測病人血液中的樣品基因；

(2)將樣品基因與表達有常見婦科惡性腫瘤特征基因的寡核苷酸基因芯片上的寡核苷酸基因序列進行雜交；

(3)將芯片雜交結果進行信號檢測，將芯片置入芯片掃描儀中，通過掃描可得到顯色結果，分別為：表達量增加為紅色，表達量降低為綠色，表達量不變為黃色；根據檢測雜交信號的顯色情況，可判斷特征基因表達的上下調(即數量的增減)情況；

(4)判讀結果，通常患有常見婦科惡性腫瘤的相關特征基因表達的上下調情況如下：

乳腺癌：表達上調的特征基因：LTA(NM_000595)；VEGFA(M27281)；

????????PRL(NM_000948)；IGF1(NM_000618)；BCL2(NM_000657)；