[發(fā)明專利]帶魚多肽的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710164544.1
• 申請日: 2007-12-05
• 公開（公告）號: CN101200751A
• 公開（公告）日: 2008-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 靳挺;吳天星;武玉學(xué)
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)寧波理工學(xué)院
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;A23J1/04;A23L1/305;A61K8/64
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務(wù)所
• 代理人: 代忠炯

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體是指一種以帶魚為原料，通過酶水解帶魚蛋白質(zhì)，制備多肽的方法。

技術(shù)背景

帶魚又名刀魚，是我國沿海產(chǎn)量較高的一種經(jīng)濟魚類，它不僅肉嫩體肥、味道鮮美，并具有較高的藥用、食療價值。帶魚蛋白質(zhì)是一種全價蛋白質(zhì)，含有人體必需的八種氨基酸；還含有鈣、鐵、磷、鎂、鋅、硒等微量元素以及多種維生素，營養(yǎng)豐富，深受國內(nèi)外消費者的青睞。

目前，帶魚的食用方法單一，主要是直接食用。由于帶魚蛋白質(zhì)是大分子物質(zhì)，不能被人體直接吸收和利用，而低分子肽等活性物質(zhì)沒有完全游離出來，降低了帶魚的保健功效。低分子肽通常只由2-10個氨基酸殘基組成，較氨基酸更易為人體所吸收，且具有某些特殊的生理活性如抗菌、抗氧化、抗腫瘤等。并且，隨著捕撈強度的增大，海洋捕撈的小帶魚產(chǎn)量呈逐年上升趨勢；小帶魚由于體型小，直接食用的價值較低；現(xiàn)在主要用來生產(chǎn)魚粉等低值產(chǎn)品，更有作為廢棄物直接丟棄，導(dǎo)致資源未得到充分利用，經(jīng)濟效益低下，甚至污染環(huán)境。

經(jīng)檢索，國內(nèi)已有人采用酶法水解魚蛋白質(zhì)制備多肽，如中國專利申請?zhí)枮?0130823.8、發(fā)明名稱為“一種海產(chǎn)小雜魚提取物的制備方法”，它公開了以海產(chǎn)小雜魚為原料提取多肽混合物制品的方法。該方法使用一種酶(木瓜蛋白酶)進行海產(chǎn)小雜魚蛋白質(zhì)的水解，其美中不足是，由于僅采用一種酶水解蛋白質(zhì)，并且在水解過程中，也沒有采取措施保持酶解液的pH在該種酶的最適pH，而氨基酸中羧基的解離度遠遠大于氨基的解離度，會引起酶解液的pH降低，從而影響酶的活性，導(dǎo)致蛋白質(zhì)水解不徹底，得到的多肽產(chǎn)品的分子量較大，即90％以上多肽的分子量在2000Da～8000Da之間，其多肽的營養(yǎng)保健效果不理想。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，提供一種能提高蛋白質(zhì)的水解效率，所得低分子肽含量高的帶魚多肽的制備方法。

本發(fā)明的方法包括以下步驟：

(1)將帶魚洗凈稱重，加入1～3倍帶魚質(zhì)量的水，絞碎成均勻的魚肉漿；

(2)將魚肉漿放入酶解罐中，升溫至45～65℃，調(diào)pH至5.5～8.5，以帶魚質(zhì)量計，添加1.0％～3.0％的內(nèi)切蛋白酶，同時添加魚肉漿質(zhì)量0.02％～0.1％的天然抑菌劑即乳酸鏈球菌素(Nisin)，攪拌水解16～24h；然后加入1.0％～5.0％的外切蛋白酶，調(diào)節(jié)溫度至45-60℃，調(diào)pH至5.0～8.0，繼續(xù)攪拌水解3～6h；

(3)攪拌水解結(jié)束后，升溫至90～95℃，保持15～20分鐘滅酶；

(4)將上述反應(yīng)完畢的水解液離心，4000rpm，15～20分鐘，取上清液；

(5)將上清液減壓濃縮至原體積的1/10～1/5，溫度50℃，壓力0.1Mpa真空干燥24～48h，得到帶魚多肽產(chǎn)品。

在步驟(2)的酶解過程中，首先，根據(jù)添加的每種內(nèi)切蛋白酶的最適溫度和最適pH，通過溫度探頭、pH探頭和相關(guān)的控制儀器，用控制加熱裝置的開關(guān)和適當(dāng)?shù)渭铀峄驂A的方法，自動控制溫度和pH保持在每種內(nèi)切蛋白酶的最適值；然后，根據(jù)添加的每種外切蛋白酶的最適溫度和最適pH，通過溫度探頭、pH探頭和相關(guān)的控制儀器，用控制加熱裝置的開關(guān)和適當(dāng)?shù)渭铀峄驂A的方法，自動控制溫度和pH保持在每種外切蛋白酶的最適值。

所述內(nèi)切蛋白酶為木瓜蛋白酶、Neutrase或Alcalase；外切蛋白酶為Flavourzyme、氨肽酶或羧肽酶。

在步驟(4)和步驟(5)之間可加入脫色步驟：在上清液中加入1％～3％的活性碳粉末，攪拌1～2h，過濾或抽濾。

本發(fā)明帶魚多肽的制備方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下顯著優(yōu)點和有益效果：

由于本發(fā)明先使用內(nèi)切蛋白酶水解，再使用外切蛋白酶水解，并在水解過程中添加乳酸鏈球菌素抑制水解液的變質(zhì)，以及采用攪拌的方法有助于蛋白酶與底物的充分接觸和產(chǎn)物的擴散。內(nèi)切蛋白酶先將蛋白質(zhì)水解為分子量較大的多肽，然后再使用外切蛋白酶進一步水解，由于內(nèi)切蛋白酶和外切蛋白酶的作用位點不同，導(dǎo)致蛋白質(zhì)水解更徹底，所得帶魚多肽的分子量范圍保持在250Da～6000Da之間；其中分子量小于1000Da的多肽含量高于50％，即低分子肽含量高，帶魚多肽營養(yǎng)保健效果比較理想。