[發明專利]一種內源性多肽在線富集和自動化分析的方法及專用裝置

無效

• 申請號: 200710159107.0
• 申請日: 2007-12-21
• 公開（公告）號: CN101464430A
• 公開（公告）日: 2009-06-24
• 發明（設計）人: 鄒漢法;胡良海;葉明亮;蔣小崗
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/08
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司
• 代理人: 馬 馳;周秀梅

1.一種內源性多肽在線富集和自動化分析的方法，其特征在于：利用限進介 質獨特的保留小分子多肽而排出大分子蛋白的性質對內源性多肽進行在線富集， 采用體積濃度0-5％的甲酸或乙酸的水溶液將樣品通過限進介質預柱進行富集，采 用含有10mM-2000mM鹽濃度pH值為1-4的緩沖溶液將預柱中富集的樣品洗脫到反 相柱頭上，將反相柱頭的樣品采用體積濃度0％到100％水/乙腈或水/甲醇溶液進行 分離和質譜檢測；

上述方法采用的裝置如下：其由自動進樣器(1)、液相色譜泵(2)、微型三 通(3)、限進介質預柱(4)、六通閥(5)、微型四通(6)、反相分離柱(7)、質 譜(8)、廢液池(9)、Pt電極(10)組成，液相色譜泵(2)經自動進樣器(1) 通過毛細管與微型三通(3)的一個端口相連，微型三通(3)的另外兩個端口分 別接限進介質預柱(4)的一端和六通閥(5)的c位；限進介質預柱(4)的另一 端接微型四通(6)的一個端口，微型四通(6)的另三個端口分別接Pt電極(10)、 反相分離柱(7)的入口端和六通閥(5)的e位，反相分離柱(7)的出口端接質 譜(8)；b位和f位分別與廢液池(9)相連；

當樣品富集時，六通閥(5)的a位和b位相連，c位和d位相連，e位和f 位相連，

當樣品洗脫和分離時，六通閥(5)的b位和c位相連，d位和e位相連，a 位和f位相連。

2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述含有10mM-2000mM鹽濃度 pH值為1-4的緩沖溶液對預柱中富集的樣品進行一次以上的洗脫和反相分離。

3.按照權利要求2所述的方法，其特征在于：所述將預柱中富集的樣品洗脫 到反相柱頭上，洗脫過程為臺階梯度洗脫，臺階梯度洗脫的濃度間隔是10mM到 1000mM。

4.一種權利要求1所述方法的專用裝置，其特征在于：其由自動進樣器(1)、 液相色譜泵(2)、微型三通(3)、限進介質預柱(4)、六通閥(5)、微型四通(6)、 反相分離柱(7)、質譜(8)、廢液池(9)、Pt電極(10)組成，液相色譜泵(2) 經自動進樣器(1)通過毛細管與微型三通(3)的一個端口相連，微型三通(3) 的另外兩個端口分別接限進介質預柱(4)的一端和六通閥(5)的c位；限進介 質預柱(4)的另一端接微型四通(6)的一個端口，微型四通(6)的另三個端口 分別接Pt電極(10)、反相分離柱(7)的入口端和六通閥(5)的e位，反相分 離柱(7)的出口端接質譜(8)；b位和f位分別與廢液池(9)相連；

當樣品富集時，六通閥(5)的a位和b位相連，c位和d位相連，e位和f 位相連，

當樣品洗脫和分離時，六通閥(5)的b位和c位相連，d位和e位相連，a 位和f位相連。