[發(fā)明專利]N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710151108.0
• 申請日: 2007-12-19
• 公開（公告）號: CN101463075A
• 公開（公告）日: 2009-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張國基
• 申請（專利權(quán)）人: 天津天成制藥有限公司
• 主分類號: C07K5/06
• 分類號: C07K5/06
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 劉 瑛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種含有最多4個氨基酸的二肽的制備方法，特別是N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的制備方法。

背景技術(shù)

酰胺氨基酸是一類極其有用的氨基酸。例如谷氨酰胺就具有許多重要的生理功能：能促進(jìn)胃腸粘膜細(xì)胞增生，維持腸道的完整性；巨噬細(xì)胞的吞噬作用、淋巴細(xì)胞的增值及蛋白質(zhì)的合成都必須依賴充足的谷氨酰胺。一般情況下人體內(nèi)能合成滿足自身需要的谷氨酰胺。但是在身體受到大創(chuàng)傷、嚴(yán)重感染等應(yīng)激狀態(tài)下，機(jī)體處于超高代謝狀態(tài)，機(jī)體谷氨酰胺庫被嚴(yán)重消耗，同時其他組織器官如小腸、淋巴細(xì)胞等都增加對血中谷氨酰胺的攝取，使血漿中和細(xì)胞內(nèi)谷氨酰胺濃度下降。說明在創(chuàng)傷應(yīng)激狀態(tài)下機(jī)體對谷氨酰胺的需要量大大增加，超過了機(jī)體的合成能力，同時，創(chuàng)傷常引起機(jī)體免疫功能的抑制，谷氨酰胺是巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞的重要能源物質(zhì)，這些細(xì)胞以很高速度利用谷氨酰胺，在如此高代謝條件下，胃腸功能受到抑制，可能引起腸粘膜損傷、通透性增高，造成細(xì)菌、毒素移位，進(jìn)一步加重機(jī)體高代謝的狀況。而谷氨酰胺是腸細(xì)胞代謝的重要基質(zhì)，充足的谷氨酰胺是小腸保持正常代謝、結(jié)構(gòu)和功能的重要條件之一。因此在身體受到大創(chuàng)傷、嚴(yán)重感染等應(yīng)激狀態(tài)下，外在大量地補充谷氨酰胺是極為必要的。

但谷氨酰胺溶解度低且不穩(wěn)定，加熱后會產(chǎn)生有毒的焦谷氨酸和氨，因此限制了谷氨酰胺的腸外應(yīng)用。而L-丙氨酰-L-谷氨酰胺不僅溶解度高(常溫下在水中的溶解度高達(dá)68克/升)，是同樣條件下游離谷氨酰胺的200倍，并且性質(zhì)穩(wěn)定，在不同的pH值條件下加熱滅菌(120℃，0.5小時)也不會產(chǎn)生有毒的焦谷氨酸和氨。最重要的是L-丙氨酰-L-谷氨酰胺能被機(jī)體快速有效地分解為丙氨酸和谷氨酰胺，滿足機(jī)體需要，而無任何副作用。L-丙氨酰-L-谷氨酰胺進(jìn)入機(jī)體后，被二肽酶分解為其組成的氨基酸：丙氨酸和谷氨酰胺，經(jīng)有微量(攝入量的1％-2％重量比)的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺從尿中排出，避免了因L-丙氨酰-L-谷氨酰胺積累可能引起的損傷。因而L-丙氨酰-L-谷氨酰胺在腸外營養(yǎng)中的應(yīng)用正日益受到重視，廣泛應(yīng)用在臨床上。

目前L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的制備方法主要有三種，

1.以卞氧羰丙氨酸在二環(huán)己基碳二亞胺存在下生成活性酯，然后與谷氨酰胺縮合成二肽，再經(jīng)催化氫化脫保護(hù)基制得。該方法中二環(huán)己基碳二亞胺雜質(zhì)很難除去，產(chǎn)品難以提純。

2.利用光氣與丙氨酰反應(yīng)生成混酐，然后與谷氨酰胺在水中反應(yīng)。最后酸化脫去保護(hù)即可得到L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。此種方法簡單，但是光氣為劇毒氣體，對人體危害極大。

3.利用N端保護(hù)的氨基酸與三本基磷反應(yīng)形成活潑酯，所得活潑酯與谷氨酰胺反應(yīng)，然后用無機(jī)酸酸化，脫去N端保護(hù)基即得L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。該方法所用的原料N端保護(hù)的氨基酸價格較高，導(dǎo)致整個工藝成本較高。

中國專利200510102315.公開了一種L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的制備方法。該方法包括在縮合劑存在下，在惰性溶劑中將D-2-鹵代丙酸和谷氨酰胺進(jìn)行縮合反應(yīng)、酸化，得到D-2-鹵代丙酰谷氨酰胺；將得到的D-2-鹵代丙酰谷氨酰胺用氨水進(jìn)行氨解反應(yīng)得L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。

中國專利200510054083.3公開了N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽合成方法：N段保護(hù)的氨基酸與三苯基氧磷、三光氣在有機(jī)溶劑中反應(yīng)，形成活潑酯。活潑酯與谷氨酰胺在無機(jī)堿水溶液中進(jìn)行反應(yīng)。用無機(jī)酸酸化至pH≤3.0，然后脫去N段保護(hù)基團(tuán)得到N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了克服已有技術(shù)中存在的不足，而提供一種工藝簡單，成本低的N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的制備方法，

為了達(dá)到以上目的，本發(fā)明采取以下方案：

一種N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的制備方法，其制備方法如下

(1).將無機(jī)堿滴加到含有L-谷氨酰胺的甲苯與水的溶液中，最終pH值達(dá)到8-11；滴加D-α-氯丙酰氯、甲苯混合溶液，用無機(jī)堿控制反應(yīng)溶液pH值在9.5-10.5；反應(yīng)溫度保持在0℃-5℃；滴加完畢后保持溫度繼續(xù)攪拌1小時，然后停止攪拌和冷卻，靜止分出甲苯層，室溫下將氯化鈉加入剩余的溶液中，滴加鹽酸至溶液pH＝1，繼續(xù)攪拌10分鐘冷卻至0℃-10℃出料、過濾、干燥得N(2)-D-α-氯丙酰-L-谷氨酰胺；