[發明專利]一種化合物及其制備方法

有效

• 申請號: 200710131804.5
• 申請日: 2007-09-18
• 公開（公告）號: CN101200427B
• 公開（公告）日: 2008-06-18
• 發明（設計）人: 夏國興;張薇;楊永梅;王雪峰;吳暉;李邦良
• 申請（專利權）人: 杭州夏洋生物工程有限公司
• 主分類號: C07C69/30
• 分類號: C07C69/30;C12P7/64;A61K31/231;A61P3/02;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

技術領域

本發明涉及一種化合物，還涉及該化合物的制備方法。?

背景技術

脂類化合物在生理上具有非常重要的意義，如脂肪在體內氧化時放出大量熱量，作為能源的儲備物；它在臟器周圍能保護內臟免受外力撞傷；在皮下有保溫作用。脂肪還是維生素A，D，E和K等許多活性物質的良好溶劑。類脂是組織細胞的重要成分，它們在細胞內和蛋白質結合在一起形成脂蛋白，構成細胞的各種膜，如細胞膜和線粒體膜等。脂類化合物主要來源于動植物，不能在人體內合成，必須由食物供給，從微生物代謝產物中獲取甚少，特別是多節孢霉菌(Nodulisporium)發酵途徑獲取亞多節孢酯天然化合物也未見過報道。?

發明內容

本發明的目的提供一種化合物，可采用小型真菌多節孢霉菌(夏瀚多節孢霉，Nodulisporium?Xiahanensis?nov.Xia)經液態發酵純培養制備方法獲得。?

本發明另一個目的是提供該化合物的制備方法。?

本發明的目的是通過下列技術措施實現的：?

一種化合物，其名稱為6，9-十七碳二烯酸-3-亞油酸甘油酯(6，9-heptadecadienoyl3-linoleoyl?glycerin?ester)，命名為亞多節孢酯(linodulisporate)。亞多節孢酯為新的化合物，屬于人體必需脂肪酸脂類物質。亞多節孢酯是一個脂類化合物，其由2條碳鏈(17碳2烯酸)構成的多不飽和亞油酸連接一個甘油酯而形成。?

分子式：C₃₈H₆₆O₅，分子量：M＝602。?

結構式為：?

該化合物為黃色，油狀粘稠物，帶有香味或特殊的氣味。相對密度在0.9-0.95之間。難溶于水，易溶于有機溶劑，如熱乙醇，乙醚、石油醚、氯仿、四氯化碳和苯等。該化合物也?具有水解、皂化及酸敗反應的特性。?

用于制備所述化合物的菌株屬小型真菌多節孢霉(Nodulisporium)，該菌分離自中國浙江省西南慶元縣百山祖自然保護區的土壤中，菌株編號ZJX-0508，根據形態觀察、培養特征和分子生物學分析，可視為一個新種，命名為夏瀚多節孢霉(Nodulisporium?Xiahanensis?nov.Xia)，已保藏于武漢中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC，地址為武漢市武昌珞珈山武漢大學)，保藏編號為CCTCC?No?M?207137，保藏日期為2007年9月3日。?

本發明所述的化合物的制備方法，包括下列步驟：?

a.發酵菌株采用保藏編號為CCTCC?M207137的菌株；?

b.菌株培養：將發酵菌株接種在固體培養基上，單菌落涂布，25～32℃培養4～10天；收集菌株的孢子；將菌株的孢子接種于種子培養基，100～250rpm，25～32℃發酵培養24～32小時，得種子液；將種子液按發酵培養基體積3～10％的接種量接種于發酵培養基，200～300rpm，25～32℃發酵培養40～72小時，收集發酵液；?

c.發酵產物提取：將發酵液與低極性溶劑在提取罐中攪拌30～120min后靜置分層，棄下層水相及中層乳濁相，上層有機相在濃縮罐中，濃縮至無法濃縮為止，即得粗品；?

d.目標產物純化：發酵提取物上柱層析，用石油醚、乙酸丁酯與無水乙醇混合溶液或石油醚與乙酸乙酯混合溶液進行洗脫，收集洗脫液，即得。?

其中所述的培養基各組分在培養基中按重量體積比(g/ml)計，碳源2～10％，氮源2～5％，無機鹽0～1％，其中固體培養基需加入1.5～3％的瓊脂，其余為水。優選為碳源4～7％，氮源3～4％，其中固體培養基需加入2～2.5％的瓊脂，其余為水。?

其中所述的碳源選自淀粉水解糖、糊精、甘油、糖蜜、葡萄糖、蔗糖、淀粉類、土豆汁、麥芽汁、豆汁、土豆浸出粉、燕麥中的一種或幾種，優選蔗糖。所述的氮源選自黃豆餅粉、玉米漿、蛋白胨、魚胨、蠶蛹水解液、尿素、銨鹽、酵母浸出物、黃豆粉、棉籽粉、氨水、硝酸鹽中的一種或幾種，優選黃豆餅粉。所述的無機鹽選自氯化鈉、氯化鎂、氯化錳、氯化鉀、氯化鈣、磷酸二氫鉀、硫酸亞鐵、硫酸鎂、硫酸錳中的一種或多種，優選硫酸鎂。經過試驗，確定本發明化合物為胞外產物，經分析其可能結構為親酯性化合物，根據低成本、易濃縮、方便后處理的原則，選擇了石油醚、乙酯、乙醇、己烷、庚烷等低極性溶劑進行試驗，最終優選石油醚為最佳萃取溶劑，其加入量與發酵液體積比為0.8∶1。萃取粗提物顏色相對較淺、單位富集，且易濃縮，溶劑用量少、成本低。?