[發明專利]HIV調節/輔助蛋白的融合蛋白

無效

• 申請號: 200710103952.6
• 申請日: 2003-05-14
• 公開（公告）號: CN101108882A
• 公開（公告）日: 2008-01-23
• 發明（設計）人: 保羅·豪利;桑賈·利勒;伊娃·費爾德
• 申請（專利權）人: 巴法里安諾迪克有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/86;A61K38/16;A61K39/12;A61K48/00;A61P31/18
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 張紅春

此案是申請日為2003年05月14日、中國申請號為03811119.5、 發明名稱為“HIV調節/輔助蛋白的融合蛋白”的發明申請的分案申請。

本發明涉及一種融合蛋白，所述蛋白包含選自Vif，Vpr，Vpu，Vpx，Rev， Tat和Nef中的至少四種HIV蛋白的氨基酸序列或者一種或多種所述蛋白的 氨基酸序列的衍生物，其中所述融合蛋白不被加工成單獨的具有天然N和 C末端的HIV蛋白。本發明還涉及編碼所述蛋白的核酸，包含所述核酸的 載體，以及制備所述蛋白的方法。所述融合蛋白，核酸和載體可用作至少 部分預防HIV感染的疫苗。

背景技術

人免疫缺陷病毒(HIV)是獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的致病因子。像 所有的逆轉錄病毒一樣，該病毒的基因組編碼Gag，Pol和Env蛋白。此外， 該病毒的基因組還編碼調節蛋白，即Tat和Rev，以及輔助蛋白，即Vpr，Vpx， Vpu，Vif和Nef。

盡管公共衛生組織努力控制AIDS流行病的播散，新發感染的數目仍在 增長。世界衛生組織估計2000年末，全球感染的人數達3.61千萬，比根據 十年前的數據預計的數目高50％(WHO&UNAIDS，UNAIDS，2000)。從全球 來看，2000年新發HIV感染的數目在530萬。

由于該流行病的持續傳播，臨床上仍需要有效的疫苗。現已發展出一 些不同的HIV-1疫苗遞送策略例如新的載體或者輔劑系統，并在不同的前 臨床背景和臨床試驗中進行了評估。進入III期臨床實驗的第一種候選疫苗 是以明礬中的包膜gp120蛋白(Francis等，AIDS?Res.Hum.Retroviruses?1998； 14(Suppl?3)(5)：S325-31))為基礎的。盡管該疫苗在較早的II期實驗中不是 很成功，其III期實驗還是已經開始了。

多年來基于包膜抗原對預防性疫苗投入努力之后，最近更多的努力集 中在將調節蛋白例如Tat，Nef和Rev用作候選疫苗抗原上。這些調節性抗原 在治療中已經使用了幾年(Miller等，Nature?Medicine?1997，3，389-94， Calarota等，Lancet?1998，351，1320-5，Ayyavoo等，AIDS，2000，14，1-9)。近 來，在小型臨床前實驗中對預防性疫苗的研究顯示，這些抗原的應用很有 前途。使用Tat和Rev，或單獨的Tat作為候選的預防性疫苗顯示可控制 SIVmac(Osterhaus等，Vaccine?1999，17，2713-4)。此外，還表明針對該病毒早 期調節蛋白的CTL對于在該病毒產生高水平的成熟病毒粒前消除感染的細 胞很重要(van?Baalen等，J.Gen.Virol?1997，78，1913-8；Addo等，PNAS， 2001，98，1781-6)。

盡管HIV的調節/輔助蛋白誘導有效的免疫應答，但如果不是全部也是 大多數都有嚴重的副作用，從而限制了它們作為疫苗的用途：Nef，Tat和Vpu 已顯示在下調CD4+和/或MHC?I類分子的表達中起作用(Howcroft等， Science，1993，260，1320-2；Schwartz等，Nature?Med.1996，2，338-42；Swann 等，Virology，2001，282，267-77；Janvier等，J.Virol.，2001，78，3971-6， Weissmann等，PNAS?1998，95，11601-6)。已知Tat介導體內的急性免疫抑制 (Cohen等，PNAS，1999，96，10842-10847)。還描述了Vpr的免疫抑制作用 (Ayyavoo等，Nature?Med.，1997，3：1117-1123)。已經描述了Vpr和Vpx在酵 母細胞中具有不同的細胞抑制和細胞毒性效果(Zhang等，Virology，1997， 230，103-12)。因此，HIV的大多數輔助/調節蛋白似乎具有疫苗配方中不期 望的功能特性。