[發(fā)明專利]腎移植免疫排斥三聯(lián)基因尿檢法及試劑盒和診斷試劑

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710099861.X
• 申請日: 2007-05-31
• 公開（公告）號: CN101314792A
• 公開（公告）日: 2008-12-03
• 發(fā)明（設計）人: 翟原
• 申請（專利權）人: 同昕生物技術（北京）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 吳小明

技術領域

本發(fā)明涉及分子生物學及醫(yī)學領域。可應用于對腎臟移植后免疫排斥反應進行無創(chuàng)監(jiān)測。具體地，本發(fā)明涉及設計及優(yōu)化適用于在微量尿液脫落細胞中同時定量擴增三種基因的PCR引物，以及克隆制備用于定量PCR的三種基因標準物片斷。

背景技術

器官移植是現代醫(yī)學的標志性學科之一。自1959年首例腎移植成功以來目前世界上已有70多萬尿毒癥患者接受了器官移植而獲得新生，而且這個數字還在以每年近5萬的速度增加。截至2003年，我國累計完成腎臟移植5萬多例，現在每年完成超過5000例，數量僅次于美國位居世界第二位。中國約有100多萬尿毒癥患者，每年還有近12萬的新增病人。對這些患者，腎臟移植是目前最重要的治療手段。然而移植腎臟的長期存活，始終是腎移植成功與否的主要問題(參考文獻1，2)。隨著配型技術的發(fā)展以及新型免疫抑制劑的臨床應用，早期急性排斥發(fā)生率明顯下降，移植腎短期存活率顯著提高。但延遲性急性和慢性排斥反應仍然是移植腎功能減退和最終移植腎喪失最主要的原因(3)。如果以半壽期(移植第1年后50％的移植物喪失功能的時間)預測腎移植的長期效果的話，近20年來，腎移植的長期存活率沒有得到明顯的改善，1年內約有10％到15％的移植腎喪失功能，5年內移植腎存活率為67％左右，10年內存活率不到38％。腎移植長期存活的主要障礙是慢性排斥反應或慢性移植腎功能衰退(4)。在中國，移植用器官多來源于尸體，少部分由親屬提供活體腎。腎臟移植后，患者需要終身服用免疫抑制劑(如環(huán)孢霉素A和FK506)用于抗排斥反應治療。但此類藥物的治療窗很窄，如果用量不足，就不能有效防止珍貴的移植腎被排斥，若劑量過大，則會產生嚴重的劑量相關性腎臟毒性作用使移植腎失功，并使嚴重的感染并發(fā)癥的發(fā)生率明顯增加從而威脅患者的生命。所以腎臟移植后及時、準確、特異的監(jiān)測對移植腎免疫排斥反應的早期發(fā)現及調整患者的免疫抑制劑用量具有極其重要的作用。

然而目前臨床上檢測移植腎排斥的方法還只限於根據臨床表現(如體溫升高，血壓異常，腹痛，甚至有尿血，等等)和血清肌酐(serum?creatinine，血肌酐SCr)升高來判定。但這些方法不能早期診斷排斥反應，往往是一旦上述癥狀出現，移植腎排斥已經發(fā)生并已進入嚴重階段，臨床上很難救治；其次是這些診斷指標缺乏特異性，因為人體其它部位出現感染時，也會誘發(fā)上述臨床癥候和血肌酐(SCr)升高，會因此而誤判，盲目增加免疫抑制藥劑量，不但徒然增加患者的經濟負擔，還會引發(fā)毒副作用甚至危及患者生命。移植腎穿刺活檢是目前臨床上唯一的權威診斷方法。但這種方法的最大缺點是其對移植器官的創(chuàng)傷性，有可能造成腎臟出血、腎周血腫、動靜脈瘺等并發(fā)癥，危害移植腎的存活(5，6)。同時手術的實施必須經過麻醉、無菌消毒、術前術后護理等一系列過程，費用昂貴。正因其創(chuàng)傷性、過程復雜和昂貴，就不可能在所有的醫(yī)院普及用來作為常規(guī)、隨時地使用的確診手段。目前在中國以至國際移植界，穿刺活檢手術一般在腎移植術后1個月、3個月、6個月及1年時間進行，以這樣的頻率，很難做到及早發(fā)現和處理。腎穿刺活組織檢查的另一個嚴重的缺陷是，活檢所取的組織大小是腎臟的十幾萬分之一，僅僅是整個移植腎的極小部分，其情況未必能反映出其它部位是否有病變而造成誤診(7)。

所以目前臨床上急需建立一種快捷、敏感、特異和無創(chuàng)的免疫檢測方法對腎臟移植后免疫排斥反應進行監(jiān)測。這對于早期發(fā)現和治療排斥反應以及指導臨床醫(yī)生合理調整免疫抑制劑用量、使之適時減少或停藥(將大大減輕病人的經濟負擔)，提高病人生存質量，降低移植患者的死亡率，延長移植腎的存活時間均具有重要意義，將有力推動器官移植事業(yè)的發(fā)展。