[發明專利]抗綠膿桿菌Fab’片段

無效

• 申請號: 200710093130.4
• 申請日: 2007-12-13
• 公開（公告）號: CN101186648A
• 公開（公告）日: 2008-05-28
• 發明（設計）人: 張雅萍;莊穎;馬思遠
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: C07K16/04
• 分類號: C07K16/04;A61K39/40;A61P31/04
• 代理公司: 北京瑞盟知識產權代理有限公司
• 代理人: 孫民興;顧小曼

1.抗綠膿桿菌Fab’片段，其特征在于：(1)所述抗綠膿桿菌Fab’片段能特異性結合綠膿桿菌；(2)所述抗綠膿桿菌Fab’片段是通過以下方法獲得的：用綠膿桿菌作為抗原免疫產蛋雞后收集所產的蛋，然后從其卵黃中分離水溶部分，并用硫酸鈉沉淀，取沉淀物，最后用胃蛋白酶水解沉淀物，收集分子量為44道爾頓的水解產物。

2.權利要求1所述的抗綠膿桿菌Fab’片段的制備方法，該方法由以下步驟組成：

(1)用綠膿桿菌作為抗原免疫的產蛋雞，取其蛋，分離出蛋黃液；

(2)加入蛋黃液9倍體積的水溶解蛋黃液，調節pH5.0、4℃放置6小時；

(3)4℃下10000轉/分離心25min，取上清液；

(4)加入18％硫酸鈉，溶解，室溫放置1h；

(5)常溫下10000轉/分離心15min，取沉淀；

(6)以與步驟(2)所用蛋黃液等體積的0.01M、pH7.4的PBS溶解沉淀，加入14％硫酸鈉，溶解，室溫放置1h；

(7)常溫下10000轉/分離心15min，取沉淀；

(8)按步驟(7)所得沉淀質量的20倍加入胃蛋白酶，并用水溶解，調節溶液pH3.5，加入適量甲苯，30℃水浴反應1.5h；

(9)加入15％硫酸銨后調節pH5.0、57℃加熱30min，然后迅速降溫至45℃以下；

(10)4℃下10000轉/分離心15min，取上清液；

(11)調節上清液pH7.2，加入20％硫酸銨，4℃下8000轉/分離心15min，取沉淀；

(12)用去離子水溶解沉淀，加明礬至明礬在溶液中的濃度為0.8～1g/100ml，調節pH7.8，4℃下8000轉/分離心15min，取上清液；

(13)加入38％硫酸銨，4℃下8000轉/分離心15min，取沉淀透析過濾除菌即可；

上述方法中的物質百分比濃度均為質量/體積百分比。

3.權利要求1所述的抗綠膿桿菌Fab’片段在制備治療綠膿桿菌感染藥物中的應用。