[發(fā)明專利]一種重組抗OPN單克隆抗體及其制備方法和用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710085147.5
• 申請日: 2007-03-14
• 公開（公告）號: CN101066999A
• 公開（公告）日: 2007-11-07
• 發(fā)明（設計）人: 李博華;錢衛(wèi)珠
• 申請（專利權）人: 上海中信國健藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/13;C12N15/64;G01N33/577;C12P21/08
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技術領域

本發(fā)明涉及免疫學技術領域。具體地說，本發(fā)明涉及一種新的抗OPN單克隆抗體，及其制備方法和用途。?

背景技術

Osteopontin(OPN)為早期的T淋巴細胞活化分子1(Eta1)，是具有多種功能的分泌型糖蛋白。其可能的功能包括參與骨骼代謝，免疫調節(jié)，創(chuàng)傷愈合，細胞生存及腫瘤的進展。根據基因結構及染色體位置，OPN是整合素結合配體家族成員，為一小分子的N連接糖蛋白(SIBLING)，該家族還包括骨骼唾液酸蛋白(BSP)，牙基質蛋白1(DMP1)，牙齒唾液酸磷酸蛋白(DSPP)以及磷酸化糖蛋白細胞外基質(MEPE)。人OPN?cDNA編碼314個氨基酸殘基的前體蛋白，其中包含16個氨基酸的信號肽，剪切后形成298個氨基酸的成熟蛋白。OPN為一高度酸化的多功能域的蛋白，理論分子量約33kDa，但由于高度的糖苷化及磷酸化，其分子量可以達到75kDa。?

OPN主要由骨骼、腎臟和上皮組織表達，但也可在子宮內膜組織、內皮細胞、T細胞、巨噬細胞、平滑肌細胞及許多的腫瘤組織中檢測到。在某些病理過程中組織中OPN的表達會上調，包括動脈硬化、瓣膜狹窄、心肌梗塞及類風濕性關節(jié)炎。OPN在數種生物體液中都可檢測到，包括人血漿、血清、乳汁及尿液，在某些惡性腫瘤、爆發(fā)性肝炎、結核及自身免疫性疾病如多發(fā)性硬化和紅斑狼瘡中其表達上調。?

OPN的活性可通過一系列受體介導，包括許多整合素和透明質酸受體CD44。OPN含有多個與整合素結合的功能域。其典型的Arg-Gly-Asp(RGD)位點可與數種αv類型的整合素(αvβ1，αvβ3，αvβ5)及α5β1，α8β1結合，含有l(wèi)opinavir(LPV)的區(qū)域可以結合α4β1，SVVYGLR位點可以結合α4β1，α4β7和α9β1。OPN和可以結合CD44的變異體，可能通過與整合素的共同作用促進細胞遷移。?細胞內的OPN通過與CD44及ERM(ezrin/radixin/moesin)蛋白的相互作用或是通過調節(jié)細胞表面的CD44表達而促進細胞的遷移。?

OPN及其蛋白酶解產物具有相互調節(jié)的作用。OPN被凝血酶、MMP-3、MMP-7或MMP-12酶解后產生OPN片段，與完整的OPN具有不同的生物學功能。例如，凝血酶、MMP-3、MMP-7酶切后可以增強整合素依賴的細胞粘附和遷移。反之，OPN通過包括轉化/活化前體或是再活化TIMP抑制的酶的機制活化MMP-2和MMP-3。?

如其命名，OPN在骨骼的代謝中發(fā)揮一定的作用。在體外，OPN可刺激破骨細胞向骨骼粘附，如果抑制這種相互作用，則可以阻斷骨骼的再吸收。OPN基因敲除的小鼠骨骼的發(fā)育表觀上是正常的，但表現出出生后某些部位骨骼再吸收的缺陷，因此也支持OPN對破骨細胞的作用。OPN還直接參與調節(jié)礦物晶體的形成及生長。在體內和體外，OPN與羥基磷灰石結合可抑制晶體的形成。炎癥反應的介導因子包括LPS，NO，IL-1β，和TNFα均可刺激OPN的表達。OPN調節(jié)巨噬細胞的分化和聚集。OPN還具有趨化因子及T細胞共刺激分子的功能，其可促進Th1細胞因子IL-12的產生。OPN基因敲除的小鼠表現為Th1反應的缺陷以及易于發(fā)生細菌和病毒的感染。但OPN在某些條件下也可抑制炎癥反應。如在體外，OPN可抑制骨關節(jié)炎軟骨細胞數種炎性介質的釋放。?

由于OPN具有重要的生理及病理學意義，因此，檢測OPN的血清濃度具有潛在的生理及病理學意義，所以迫切需要一種能有效、快速檢測OPN在血清中濃度的產品。?

發(fā)明內容

本發(fā)明的需要解決的技術問題之一是提供一種重組的抗OPN單克隆抗體，以克服現有技術的不足。?

本發(fā)明需要解決的第二個技術問題是提供一種編碼上述抗OPN單克隆抗體的DNA分子。?

本發(fā)明需要解決的第三個技術問題是提供一種上述單克隆抗體的用途。?

本發(fā)明需要解決的第四個技術問題是提供一種該單克隆抗體的制備方法。?

為達到上述發(fā)明目的，本發(fā)明一方面提供了一種重組的抗OPN抗體，該抗體含有重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其特征在于，輕鏈可變區(qū)具有SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列，重鏈可變區(qū)具有SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列。?

本發(fā)明另一方面提供了編碼上述單克隆抗體的DNA分子。?

在一個較佳的實例中，該DNA分子含有SEQID?NO：3所示的編碼所述單抗輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及SEQID?NO：4所示的編碼所述單抗重鏈可變區(qū)的核苷酸序列。?