[發明專利]含抗HLA－G的單克隆抗體的癌癥診斷試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 200710075443.7
• 申請日: 2007-07-31
• 公開（公告）號: CN101358964A
• 公開（公告）日: 2009-02-04
• 發明（設計）人: 葉尚勉
• 申請（專利權）人: 葉尚勉
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;G01N33/577
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司
• 代理人: 李高峽

技術領域

本發明涉及一種單克隆抗體，具體地說，涉及一種抗人類白細胞抗原G(HLA-G)的單克隆抗體及其分泌該抗體的雜交瘤細胞株。?

本發明還涉及利用該抗體制備的診斷惡性腫瘤的酶聯免疫測定試劑盒，以及該試劑盒在癌癥診斷，預后評價，治療方案的選擇以及治療監測的臨床應用。?

背景技術

人類白細胞抗原G(HLA-G)是一種非經典I類白細胞抗原(見Geraghtyet?al.Proc?Natl?Acad?Sci?U?S?A.1987；84：9145-9)。該白細胞抗原的基因位于第6對染色體的短臂上；基因和表達的產物與經典I類白細胞抗原(HLA-A，B和C)有86％雷同。HLA-G與經典I類白細胞抗原相比有兩個重要特點：一是、在正常生理情況下，HLA-G僅在胎盤的絨毛膜細胞表達(見Kovats?et?al.Science.248：220。1990；McMaster?et?al.J?Immunol.154：3771，1995)而HLA-A，-B和-C在幾乎所有的有核體細胞均有表達。二是、HLA-G不具有多態性：HLA-G只有一種，僅有6個等位基因；而經典I類白細胞抗原有96種，536個等位基因。不過，HLA-G基因的轉錄產物可被剪切成為異構體。現已觀察到四種表達膜蛋白的HLA-G?mRNA的異構體：HLA-G1、HLA-G2、HLA-G3和HLA-G4和三種表達可溶性蛋白的HLA-G?mRNA的異構體：HLA-G5，HLA-G6和HLA-G7。(見Ishitani?et?al.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85：3947。1992；Kirszenbaum?et?al，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91：4029。1994；Fujii?et?al?J.Immunol.153：5516。1995)。經十多年來研究已經證明：HLA-G具有抑制自然殺傷細胞(NK)和細胞毒性T淋巴細胞(CTL)的功能，在胎兒的免疫耐受基理中起著重要的作用(有關綜述見LeMaoult?et?al.Tissue?Antigens.62：273.2003；)。?

腫瘤在發生和發展變化過程中，要表達一些不同于正常組織的腫瘤抗原。免疫系統對這些發生癌變的細胞有排斥消除的功能，稱之宿主的免疫監視。但在已經患上癌癥病人，癌細胞明顯地逃過了宿主的免疫監視，這種現象稱之為腫瘤的免疫逃逸。在腫瘤生物學中，經典I類白細胞抗原族基因表達的下調是一個常見的現象(有關綜述見Garrido?et?al，Immunology?Today18：89.1997)。由于HLA-I族分子在細胞毒性的T淋巴細胞的活化中發揮中心作用，HLA-I?族基因表達的下調就成為腫瘤逃逸機制之一。?

因為HLA-G具有抑制自然殺傷細胞和細胞毒性T淋巴細胞的功能，在胎兒的免疫耐受基理中起著重要的作用。如果腫瘤細胞出現HLA-G的異常表達，就有可能像其在胎兒的免疫耐受基理起的作用一樣，抑制宿主對腫瘤細胞的免疫排斥，而參與腫瘤免疫逃逸機制。從上世紀九十年代中(1996)起，已有大量的研究結果發表證明：1)癌細胞出現HLA-G的異常表達也是腫瘤生物學中的一個普遍現象；2)HLA-G在腫瘤免疫逃逸機制中起作重要作用；3)測定HLA-G有較高的臨床應用價值，使HLA-G能成為一個新的、較為理想的腫瘤標志物。?

如在本申請人較早的中國授權專利(專利號ZL200410040919.X)中公開了利用高特異性的抗HLA-G的單克隆抗體HGY檢測常見惡性腫瘤病變中的HLA-G異常表達來診斷癌癥的方法，利用免疫印漬技術和免疫組化技術測定細胞樣品或組織樣品中HLA-G的異常表達，在癌癥診斷中取得了良好的效果。?

酶聯免疫吸附測定法(ELISA)是一種非常靈敏的測定血清或其它體液樣品中抗原或抗體的方法。在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標記的抗原或抗體，③酶作用的底物。一般說來，ELISA方法測定結果的準確性，取決于固相抗原或抗體(一抗)以及酶標抗原或抗體(二抗)的特異性和敏感性，即，一抗和二抗特異性和敏感性越好，ELISA測定結果的準確率越高。?

在臨床診斷中，以血清或體液作為測定樣品具有極大的好處，如：采集血液樣品相對簡便，無明顯的創傷，可以反復檢測，可方便地用于病程及治療監測。?