[發明專利]腫瘤靶向性腺相關病毒載體的構建和應用無效
| 申請號： | 200710071560.6 | 申請日： | 2007-10-09 |
| 公開（公告）號： | CN101173299A | 公開（公告）日： | 2008-05-07 |
| 發明（設計）人： | 王毅剛;黃芳;張義玲;姜永厚;錢程;劉新垣 | 申請（專利權）人： | 浙江理工大學 |
| 主分類號： | C12N15/86 | 分類號： | C12N15/86;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 杭州中成專利事務所有限公司 | 代理人： | 唐銀益 |
| 地址： | 310018浙江省*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 腫瘤 靶向 性腺 相關 病毒 載體 構建 應用 | ||
1.一種腫瘤靶向性腺相關病毒載體系統rAAV-hTERT-gene的構建方法，其特征在于：用腫瘤特異性hTERT啟動子控制腺相關病毒所攜帶的外源基因表達，構建成具有腫瘤靶向性、且可任意插入一種具有抗癌作用治療基因的腺相關病毒載體系統rAAV-hTERT-gene。
2.根據權利要求1所述的腫瘤靶向性腺相關病毒載體系統rAAV-hTERT-gene的構建方法，其特征在于包括以下步驟：
1)、設計hTERT啟動子兩端特異性引物，用PCR方法，以人肝癌細胞株SMMC-7721的DNA基因組為模板，所得到的PCR產物為hTERT啟動子-378～+78nt序列；
2)、用限制性內切酶將腺相關病毒載體pAAV-MCS的啟動子CMV去掉，并替換成上述hTERT啟動子，得到腫瘤靶向性腺相關病毒載體pAAV-hTERT-gene；
3)、利用腺相關病毒重組系統，pAAV-hTERT-gene、pAAV-RC和pHelper三質粒共轉染AAV293細胞，得到腫瘤靶向性腺相關病毒載體系統rAAV-hTERT-gene。
3.按照權利要求1或2所述方法構建的腫瘤靶向性腺相關病毒rAAV-hTERT-hTRAIL，其特征在于：該病毒為腫瘤靶向性腺相關病毒載體系統rAAV-hTERT-gene攜帶具有廣泛選擇性抗腫瘤活性的hTRAIL基因。
4.如權利要求3所述的腫瘤靶向性腺相關病毒rAAV-hTERT-hTRAIL的構建方法，其特征在于包括以下步驟：
1)、設計hTRAIL基因兩端特異性引物，在其上設計特異限制性內切酶位點便于克隆，應用RT-PCR的方法從健康人外周血克隆出全長人hTRAIL基因；
2)、將hTRAIL基因克隆入pAAV-hTERT-gene中，得到含hTRAIL基因的載體pAAV-hTERT-hTRAIL；
3)、利用腺相關病毒重組系統，pAAV-hTERT-hTRAIL、pAAV-RC和pHelper三質粒共轉染AAV293細胞，得到腫瘤靶向性重組病毒rAAV-hTERT-hTRAIL。
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