[發明專利]一種建立大鼠乙酸胃潰瘍疾病復發模型的方法

無效

• 申請號: 200710068261.7
• 申請日: 2007-04-28
• 公開（公告）號: CN101069747A
• 公開（公告）日: 2007-11-14
• 發明（設計）人: 王金福;王國忠
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;G01N33/48
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術領域

本發明屬生物技術，涉及一種建立動物乙酸胃潰瘍疾病復發模型的方法，建立的動物乙酸胃潰瘍疾病復發模型可應用于抗潰瘍復發藥物的篩選，也可應用于消化性潰瘍復發機理的研究。

背景技術

消化性潰瘍是指消化道內受胃液、胃酸和胃蛋白酶浸浴范圍內黏膜層、黏膜下層，甚至肌層和漿膜在多種因素影響下發生的局限性組織缺損性疾病，是一種常見病、多發病。該疾病多發生在胃和十二指腸，其特點是容易復發，而且難于防止。因此，建立消化性胃潰瘍復發的動物模型，可用于篩選高效的抗潰瘍復發藥物，研究消化性潰瘍復發機理，達到徹底治愈消化性潰瘍的目的。

大鼠胃潰瘍模型在病理形態和潰瘍愈合過程等方面都與人類的消化性胃潰瘍極其相似。文獻報道腹膜內注射IL-1β和腹腔內注射TNF-α能夠誘導已愈合的乙酸潰瘍復發。本專利用100％的乙酸復制大鼠乙酸胃潰瘍模型，在潰瘍制作后的第25天，所有大鼠潰瘍全部自然愈合。由此，在潰瘍制作后的第25天～54天，用灌胃法給予阿司匹林。至潰瘍制作后的第55天，成功誘導了自然愈合后的潰瘍復發，建立了大鼠胃潰瘍復發新模型。

發明內容

本發明的目的是提供一種建立大鼠乙酸胃潰瘍疾病復發模型的方法，通過以下方案實現：(1)建立大鼠乙酸胃潰瘍及潰瘍自然愈合模型，(2)采用阿司匹林誘導已自然愈合的潰瘍復發，(3)測定大鼠潰瘍復發過程中的生理生化指標變化。具體步驟如下：

(1)建立大鼠乙酸胃潰瘍及潰瘍自然愈合模型：

用乙醚麻醉大鼠，剖腹后用內徑6mm的塑料管置于胃體與幽門交界處，向管內注入100％(VN)的乙酸75μl，25秒后用棉簽拭去塑料管內的乙酸，依次縫合腹壁各層，關閉腹腔，由此制作出大鼠乙酸潰瘍。然后在潰瘍制作后，定期處死大鼠，于肉眼及顯微鏡下觀察潰瘍形態及潰瘍自然愈合過程。

本發明用乙酸涂布大鼠胃體與幽門交界處前壁，第一步行大鼠乙酸胃潰瘍模型制備。

本發明在制備大鼠胃潰瘍后第3、15、25天用乙醚麻醉分批處死大鼠，以胃壁涂乙酸的部位為中心，沿胃長軸進行取材，切下涂乙酸的部位，固定在4％多聚甲醛緩沖液中4小時。將固定好的組織經酒精梯度脫水、二甲苯透明、浸蠟等過程制成蠟塊后，用Leica切片機進行4μm厚度的連續切片、粘片、烘片和染色，第二步行Olympus光學顯微鏡下乙酸涂布處組織學及病理形態學檢測。

(2)用阿司匹林誘導已自然愈合的潰瘍復發：

在所有大鼠乙酸潰瘍全部自然愈合的當天(潰瘍制作后第25天)開始，每天大鼠禁食4小時后，用灌胃的方法給予大鼠阿司匹林(40mg/公斤體重/天)，然后再禁食1小時，直至在第35天、45天和55天后分批處死大鼠，檢測自然愈合后潰瘍的復發。

本發明將腺腔內徑大于8μm(約為正常腺腔內徑的3倍)作為判斷腺體囊狀擴張的標準，于400倍光學顯微鏡下測量H-E染色切片中再生黏膜內呈囊狀擴張的腺體數(個/視野)，第一步行擴張腺體數量測定。

本發明于100倍光學顯微鏡下測量H-E染色切片中再生黏膜上皮細胞表面到黏膜肌層之間的距離(微米)，第二步行再生黏膜厚度測定。

本發明于低倍光學顯微鏡下找到H-E染色切片黏膜下組織的血管高密度區后，在200倍光學顯微鏡下計數已形成血管腔結構的毛細血管(個/視野)，第三步行黏膜下組織中的微血管數量測定。

本發明于400倍光學顯微鏡下計數H-E染色切片黏膜下組織中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、淋巴細胞、漿細胞和巨噬細胞的數量(個/視野)，第四步行黏膜下組織中的炎細胞數量測定。

本發明造成大鼠胃潰瘍復發所用的藥物是阿司匹林，獲得了大鼠乙酸潰瘍復發新模型。

(3)通過測定大鼠潰瘍復發過程中的生理生化指標變化，證實胃潰瘍的復發，研究復發機理：

用過量的乙醚麻醉處死大鼠，打開腹腔，收集胃粘膜、胃粘液、血清和血漿，測定胃黏膜前列腺素E₂(PGE₂)、胃粘液量、胃黏膜血流、表皮生長因子(EGF)、轉化生長因子-α、血管內皮生長因子、腫瘤壞死因子-α和白細胞介素-1β(IL-1β)含量。

本發明用載玻片刮取胃粘膜，第一步行胃黏膜前列腺素E₂含量測定。

本發明通過結扎幽門，4小時后結扎賁門，收集胃內容于試管中，第二步行胃液量測定。

本發明收集胃內容于試管中，第三步行pH計測定胃液的pH值。

本發明沿胃小彎剪開并外翻，浸入阿利斯藍染液中，孵育2小時后將胃取出，吸取孵育液，用722型分光光度計進行測定，第四步行胃粘液含量測定。