[發明專利]一種分子量內標的制備方法及用該方法制備的分子量內標

有效

• 申請號: 200710064713.4
• 申請日: 2007-03-23
• 公開（公告）號: CN101050474A
• 公開（公告）日: 2007-10-10
• 發明（設計）人: 高陽;陳初光;馬斌;王曙光
• 申請（專利權）人: 鼎生科技（北京）有限公司;基點認知技術(北京)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12P19/34;C12N15/11
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司
• 代理人: 張濤

1.一種分子量內標的制備方法，以pUC18質粒為模板，固定上游引物5′GCGAAACCCGACAGGACTA3′，選取相應距離設計下游引物，擴增得到多個核苷酸片段。

2.根據權利要求1所述的分子量內標的制備方法，所述下游引物分別為

70R：5′ACAGGAGAGCGCACGAGG??3′；

80R：5′CAGGGTCGGAACAGGAGAG??3′；

100R：5′GACAGGTATCCGGTAAGCGG??3′；

120R：5′TTCCCGAAGGGAGAAAGGC??3′；

140R：5′GCTATGAGAAAGCGCCACG??3′；

160R：5′CTGAGATACCTACAGCGTGAGC??3′；

180R：5′AGCGAACGACCTACACCGA??3′；

200R：5′GTGCACACAGCCCAGCTTG??3′；

240R：5′TACCGGATAAGGCGCAGC??3′；

280R：5′GATAAGTCGTGTCTTACCGGGT??3′；

320R：5′CGCTCTGCTAATCCTGTTACCA??3′；

360R：5′GCCACCACTTCAAGAACTCTGT??3′；

400R：5′CAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGT??3′；

450R：5′ATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCC??3′；

490R：5′ACAAAAAAACCACCGCTACCA??3′；

500R：5′CTGCTTGCAAACAAAAAAACC??3′；

分別擴增得到70bp，80bp，100bp，120bp，140bp，160bp，180bp，200bp，240bp，280bp，320bp，360bp，400bp，450bp，490bp，500bp片段。

3.根據權利要求2所述的分子量內標的制備方法，所述擴增的反應條件為：94℃?2min；30cycles：94℃?20sec，58℃?40sec，72℃?40sec；70℃?10min。

4.根據權利要求1所述的分子量內標的制備方法，所述上游引物帶有熒光標記物。

5.根據權利要求4所述的分子量內標的制備方法，所述熒光標記物為ROX，FAM，HEX，JOE，TMR，LIZ或Cy5。

6.權利要求1至5任一所述的分子量內標的制備方法制備得到的分子量內標。