[發明專利]總天麻素及結合天麻素的檢測方法

無效

• 申請號: 200710050639.0
• 申請日: 2007-11-28
• 公開（公告）號: CN101169355A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 易進海;劉玉紅;陳燕;黃志芳;劉云華
• 申請（專利權）人: 四川省中醫藥科學院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N33/15
• 代理公司: 成都立信專利事務所有限公司
• 代理人: 濮家蔚

技術領域

本發明涉及一種對天麻素成分的檢測方法，特別是對同時含有游離態和結合態天麻素的被檢品中的總天麻素含量，和/或結合天麻素含量的檢測方法。

背景技術

天麻為中國藥典中收載的一種常用中藥，為蘭科植物Gastrodia?elata?Bl.的干燥塊莖，具有平肝息風止痙之功效，可用于頭痛眩暈，肢體麻木，小兒驚風，癲癇抽搐，破傷風等。以天麻為有效成分的藥物，有單方的天麻制劑(如全天麻膠囊)和復方天麻制劑(如天麻醒腦膠囊、天麻首烏片、天麻丸、大川芎丸等)。迄今，國內外學者已對天麻的化學成分、藥理作用等方面做了大量的研究工作，并逐步建立了天麻藥材的質量控制標準。

已有研究表明，天麻素為天麻的活性成分，因此該成分已作為天麻藥材及其制劑的質量控制指標性成分。如，2005版《中國藥典》收載的HPLC法測定天麻藥材和全天麻膠囊中天麻素的含量作為質量控制的方法；張磊等對“復方天麻顆?！?《安徽醫藥》2006；10(12)：919-920)、李洪剛等對“通天口服液”(《中國藥業》2005：14(19)：55-56)，潘震宇等對“天麻頭風靈片”(《中醫藥導報》2005：11(5)：61-63)等制劑中天麻素含量也分別采用HPLC法進行測定的方法。

現有的研究已發現，天麻藥材中化學成分除天麻素(即游離天麻素)外，還含有另一類天麻素與檸檬酸(citric?acid)縮合而成的各種酯類成分(王莉：“天麻化學物質基礎及質量控制方法研究”，《中國科學院研究生院博士學位論文》p10)，如巴利森苷，巴利森苷B，巴利森苷C等。天麻素與檸檬酸縮合的各種酯類成分可稱為結合天麻素，天麻素和結合天麻素之和即為其所含有的總天麻素。

巴利森苷：R₁＝R₂＝R₃＝R

巴利森苷B：R₁＝R₂＝R，R₃＝H

巴利森苷C：R₁＝R₃＝R，R₂＝H)

經本發明人的深入研究發現，在天麻藥材中，結合天麻素的含量遠高于按2005版《中國藥典》的方法直接檢測得到的天麻素(即游離天麻素)的含量。深入的研究還發現，結合天麻素與天麻素可具有相同或相似的藥效活性。例如，天麻素(游離態)和巴利森苷(結合態)對體外模擬腦缺血損傷大鼠腦微血管內皮細胞(BMEC)的保護作用試驗結果已顯示，天麻素和巴利森苷各實驗劑量(12.5，25，50，100，200mg/L)可明顯增強BMEC活力，提高受損內皮細胞(EC)的生存率，促使EC?NO分泌增加，表明天麻素和巴利森苷對體外培養的大鼠BMEC缺血損傷均具有一定的保護作用。

由于目前的含量檢測及質量控制方法僅能實現對天麻藥材及其制劑中的游離天麻素進行檢測，難以客觀真實地反映天麻藥材及其制劑的內在質量，以及作為在體內發揮藥效作用的全部活性成分的總量，在藥物生產和臨床使用中對實際質量的控制、以及對治療效果及不良反應的掌握和對藥材的合理、節約的利用等方面，都存在明顯的缺陷。

發明內容

基于上述情況，本發明將提供一種能對天麻藥材及其制劑中的總天麻素和/或結合天麻素含量進行檢測的方法。

本發明所說的總天麻素的檢測方法，是將至少含有結合天麻素成分的被檢品原料經堿性條件水解后，再檢測其游離態天麻素成分的含量。其中所說的至少含有結合天麻素成分的被檢品原料，是指被檢品原料中可以為只含有結合天麻素成分，也可以是同時含有結合天麻素和天麻素(即游離天麻素)兩類成分。

對按本發明上述方式經堿性水解后含有游離態天麻素成分被檢品的檢測，可以采用目前已有使用和/或報道的各種檢測方法進行，例如可采用如2005版中國藥典附錄VI?D的高效液相色譜法對該游離態天麻素成分的含量進行檢測。

由于結合天麻素是一類由天麻素結構中的-OH與檸檬酸所成的酯類化合物，因此按目前常規方式用溫和的堿性條件很容易將其水解，得到游離的天麻素成分。例如，在常溫至不超過80℃的加熱條件，都可以使所說的水解反應順利進行和完成，其中優選的水解溫度為25℃-60℃。所說的堿性水解一般在pH大于12的水溶液、稀醇溶液等堿性溶液中進行，可更有利于水解反應的完全，而在堿性較弱的條件下進行，則可能導致水解反應的不完全，例如可優選為堿濃度≥0.25mol/L的水解環境。所用的堿性成分一般可以選擇如氫氧化鈉、氫氧化鉀等常用的堿金屬氫氧化物。

本發明的上述方法在具體實施時，根據被檢品原料的不同情況，可以分別采用下述的不同方式或途徑進行。