[發明專利]從紅豆杉中提取分離紫杉醇及其它紫杉烷類化合物的方法

無效

• 申請號: 200710050183.8
• 申請日: 2007-09-30
• 公開（公告）號: CN101397284A
• 公開（公告）日: 2009-04-01
• 發明（設計）人: 孫莉莉;韋海洪;梁晶;唐江明;李振志
• 申請（專利權）人: 桂林市振達生物科技有限責任公司
• 主分類號: C07D305/14
• 分類號: C07D305/14;A61K36/13
• 代理公司: 桂林市持衡專利商標事務所有限公司
• 代理人: 馬 蘭

(一)技術領域：

本發明涉及從天然植物中提取分離紫杉醇及其它紫杉烷類化合物的方法，具體涉及從紅豆杉中提取分離紫杉醇及其它紫杉烷類化合物的方法。

(二)背景技術：

紫杉醇(paclitaxel，商品名Taxol)是從紅豆杉屬植物中分離得到的一種具有獨特抗癌作用的二萜類化合物。它在臨床上廣泛應用于卵巢癌、乳腺癌、小細胞和非小細胞肺癌、食道癌、頭頸癌、抗化療白血病等多種癌癥的化療，具有確切的療效。作為唯一促進微管聚合的抗癌新藥，紫杉醇產品Taxol和Taxotere已成為主要的抗癌藥物之一。制備紫杉醇的方法包括：1)自紫杉或其它可再生的紫杉屬植物中提取Taxol；2)自其它天然紫杉烷(10-去乙?；涂ㄍII)化合物半合成Taxol或Taxotere；3)從頭全合成。目前為止，僅僅提取和半合成方法實現了產業化，因紫杉醇結構復雜，已報道的全合成方法路線長、收率低、成本極高，很難達到產業化的要求。在上述方法中，常采用從紫杉屬植物中提取的方法制備紫杉醇，其步驟一般為：浸出(或超聲或微波提取)————脫脂——萃取得到粗提物——2-3次工業色譜分離——結晶——溴化——正相色譜分離——重結晶得產品；并在此基礎上發展了許多改進工藝，包括固相萃取和專用反相柱的使用以及省去溴化過程等，如申請號為01110208.X，名稱為<<一種聯合制備高純度紫杉醇、三尖杉寧堿、10—脫乙?；涂ㄍII的方法>>的中國發明專利，公開了一種從紫杉植物的樹葉、樹皮或樹枝的醇提取物中聯合生產高純紫杉醇、10—脫乙?；涂ㄍII和三尖杉寧堿的方法，它是用乙酸丁酯溶解醇提取物后，用碳酸氫鈉溶液反萃取去除雜質，將有機相減壓蒸發除去溶劑，然后用乙腈溶解殘渣，冷凍結晶得到10—脫乙?；涂ㄍII；以結晶后的母液為原料，用以高分子填料為固定相的反相色譜法分離和純化三尖杉寧堿和紫杉醇；在反相色譜法運作中，采用冷凍結晶法分離洗脫液中的有效成分，再結合以硅膠為固定相的正相色譜法深度純化紫杉醇產品，其純度可達99.6％以上。

(三)發明內容：

本發明將提供一種從紅豆杉中提取分離紫杉醇及其它紫杉烷類化合物的方法，其中，所述其它紫杉烷類化合物為三尖杉寧堿、10-去乙?；仙即肌涂ㄍII、10-去乙?；涂ㄍII、7-木糖基-紫杉醇、7-表-紫杉醇和7-木糖基-10-去乙?；仙即?。

本發明從紅豆杉中提取分離紫杉醇及其它紫杉烷類化合物的方法，它包括：提取——脫脂——萃取——分別對有機相和水相進行粗分離——反相色譜精分離——結晶；

其中，所述提過程取為依次用體積濃度80-95％、60-75％和20-55％的乙醇對紅豆杉原料進行提取；可采用紅豆杉的樹皮或枝葉為原料，將其在陰暗處自然晾干后粉碎至40-100目再進行提取；所述乙醇的用量一般為紅豆杉原料重量的5-8倍v/w；提取的時間最好為5-8小時；合并三次提取所得的提取液，回收乙醇后，濃縮至紅豆杉原料重量的5-10倍，得到提取液；

所述脫脂過程為向濃縮后的提取液中加入等體積的非極性溶劑脫酯三次，收集水層，濃縮后得到脫酯提取液；所述非極性溶劑可選自6號溶劑汽油、120號溶劑汽油、石油醚、正己烷中的任意一種；

所述萃取過程為將脫酯提取液用與其等體積的低碳鏈酯萃取三次，分別合并三次萃取所得的有機相和水相；其中，所述低碳鏈酯可選自乙酸乙酯、乙酸正丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯或乙酸異戊酯中的任意一種；

所述對有機相進行粗分離是將萃取所得的有機相減壓濃縮，得到浸膏A；將浸膏A先上氧化鋁層析柱，氧化鋁層析柱所填充的氧化鋁可為浸膏A的20-50倍(w/w)；可用低碳鏈酯和溶劑汽油的混合液作為洗脫劑進行洗脫，其中，低碳鏈酯和溶劑汽油的體積比最好為1：9-9：1，所得洗脫液減壓濃縮得到浸膏B；將浸膏B用丙酮溶解，得到拌有浸膏B的丙酮溶液，其中，丙酮的用量以能溶解浸膏B為適量；將拌有浸膏B的丙酮溶液與去活性硅膠均勻混合(丙酮的體積：去活性硅膠重量＝2：1)，再將其加載到上樣量的30-100倍(w/w)的正相硅膠柱上，用低碳鏈酯和溶劑汽油的混合液作為洗脫劑進行洗脫，其中，低碳鏈酯和溶劑汽油的體積比最好為1：9-9：1；分段收集紫杉醇及其它紫杉烷類化合物的洗脫液，進行減壓濃縮、干燥后得到富集紫杉醇和其它紫杉烷類化合物的濃縮物A；上述過程中，所述低碳鏈酯與萃取過程中的選取范圍相同；溶劑汽油可為6號溶劑汽油，或90號溶劑油，或120號溶劑汽油等，對于洗脫的方式最好采用梯度洗脫；