[發(fā)明專利]一種快速測定青霉素酰化酶酶活的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200710048113.9 | 申請日： | 2007-11-13 |
| 公開（公告）號： | CN101201356A | 公開（公告）日： | 2008-06-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張嗣良;施曉疌;儲炬;莊英萍;王永紅;袁中一 | 申請（專利權(quán)）人： | 華東理工大學(xué) |
| 主分類號： | G01N33/543 | 分類號： | G01N33/543;G06F19/00 |
| 代理公司： | 上海光華專利事務(wù)所 | 代理人： | 許亦琳;余明偉 |
| 地址： | 200237*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 快速 測定 青霉素 酰化酶酶活 方法 | ||
1.一種快速測定青霉素酰化酶酶活的方法，包括下列步驟：
a)取青霉素酰化酶基因工程菌發(fā)酵液用pH7.4-7.8的磷酸鹽緩沖液或Tris-HCl緩沖液稀釋適當(dāng)倍數(shù)；
b)用pH7.4-7.8的磷酸鹽緩沖液或Tris-HCl緩沖液配制NIPAB溶液；
c)取步驟a獲得的稀釋液與步驟b獲得的NIPAB溶液先后加入酶標(biāo)板，控制反應(yīng)體系中NIPAB的量為過量；
d)在37℃，用酶標(biāo)儀振動混勻下，在405nm處動態(tài)曲線方式連續(xù)檢測吸光度4-5分鐘，以時間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)獲得動態(tài)反應(yīng)曲線；
e)動態(tài)曲線減去空白板與空白樣后線性回歸得斜率k與截距b；
f)計算酶活：
其中：
酶活力單位為U/L
p：標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率
V0：反映體系總體積，單位為ml
V1：酶液體積，單位為ml。
2.如權(quán)利要求1所述快速測定青霉素酰化酶酶活的方法，其特征在于，步驟a和b中所述緩沖液為pH7.5的磷酸鹽緩沖液。
3.如權(quán)利要求1所述快速測定青霉素酰化酶酶活的方法，其特征在于，步驟b中所述NIPAB溶液的濃度為0.9mg/ml，步驟c中所述步驟a獲得的混合液與步驟b獲得的溶液以等體積的量先后加入酶標(biāo)板。
4.如權(quán)利要求1所述快速測定青霉素酰化酶酶活的方法，其特征在于，所述步驟d為在室溫下，用酶標(biāo)儀振動混勻下，在405nm處動態(tài)曲線方式連續(xù)檢測吸光度4-5分鐘，以時間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)獲得動態(tài)反應(yīng)曲線；所述步驟f中，計算酶活的公式為：
5.如權(quán)利要求1或2或3所述快速測定青霉素酰化酶酶活的方法，其特征在于，步驟d中，
用酶標(biāo)儀動力學(xué)檢測時，相鄰兩次檢測的時間間隔為0.5分鐘。
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