[發明專利]抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體及其制備方法

無效

• 申請號: 200710048067.2
• 申請日: 2007-11-09
• 公開（公告）號: CN101429249A
• 公開（公告）日: 2009-05-13
• 發明（設計）人: 熊思東;于寧;徐薇
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C07K16/26
• 分類號: C07K16/26;G01N33/531;G01N33/577;C12N15/13;C12N5/18
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司
• 代理人: 嚴新德

技術領域：

本發明涉及生物工程領域以及腫瘤免疫治療領域，涉及一種單克隆抗體，特別是一種抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體及其制備方法。

背景技術：

腫瘤生物治療是繼手術治療、放射治療和化學藥物治療之后新型的腫瘤治療手段，其中，針對腫瘤抗原物質而研制的單克隆抗體(monoclonalantibody，mAb)是目前腫瘤生物治療的熱點之一。抗原抗體反應的特異性決定了針對腫瘤特異性靶抗原的mAb會優先與相應的腫瘤組織結合，而不識別正常的組織。單克隆抗體不僅可以通過ADCC(抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用)及CDC(細胞依賴的細胞毒作用)等免疫效應機制發揮抗瘤作用，還可以直接誘導腫瘤細胞凋亡；同時利用單克隆抗體識別腫瘤細胞的特異性，可通過將放療化療藥物偶聯到單克隆抗體上給藥從而降低藥物對正常組織的非特異損傷，減少治療的副作用。單克隆抗體正是以其特異性和敏感性成為眾所矚目的腫瘤治療的新方法。

人絨毛膜促性腺激素(human?chorionic?gonadotrophin，hCG)是由孕婦胚胎合體滋養層細胞分泌的糖蛋白激素，在維持早孕婦女的黃體功能和促進妊娠進行、防止母體排斥妊娠產物等方面具有重要的生理功能。hCG與人黃體生成素(hLH)、卵泡刺激素(FSH)和促甲狀腺激素(TSH)等同屬糖蛋白激素家族。hCG由α鏈和β鏈組成，hCG與hLH、FSH和TSH具有完全相同的α鏈，而具有獨特的與功能相關的β鏈。

自Gailani等報道非滋養層腫瘤細胞異位表達hCG以來，腫瘤細胞表達的異位hCG(ectopice?hCG，ehCG)與腫瘤發生、發展的關系受到人們關注。許多不同類別和組織來源的腫瘤細胞都能不同程度地表達ehCG。腫瘤細胞自分泌的ehCG具有生長因子活性，能促進和調控腫瘤細胞的增殖、分化和生長，使腫瘤細胞在其微環境中能自我生長；膜結合型ehCG使腫瘤細胞表面呈負電荷，推測可能與腫瘤的轉移特性、免疫耐受等有一定的關系，因而，ehCG可以作為mAb生物治療的一種理想靶抗原。

由于hCG與其他性激素具有相同的α鏈，因此以hCG獨特的β鏈(hCGβ)作為靶抗原，制備抗hCGβ的mAb，可以成為腫瘤免疫生物治療的一種理想手段。

發明內容：

本發明的目的在于提供一種抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體及其制備方法，所述的這種抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體及其制備方法要解決現有技術中的抗腫瘤藥物治療腫瘤效果不佳，副作用大的技術問題。

本發明提供了一種抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體，所述單克隆抗體特異性結合人絨毛膜促性腺激素β亞基蛋白、或者特異性結合表達人絨毛膜促性腺激素β亞基蛋白的腫瘤細胞。

進一步的，所述的人絨毛膜促性腺激素β亞基蛋白具有SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列。

進一步的，所述的人絨毛膜促性腺激素β亞基蛋白具有SEQ?ID?NO：2所示的DNA序列。

進一步的，所述的單克隆抗體的恒定區基因序列等同于所有BALB/c小鼠來源IgG2a抗體的相應序列，與靶抗原特異結合的所述的可變區(含關鍵CDR序列和附屬骨架區序列)具有SEQ?ID?NO：3所示的氨基酸序列。

進一步的，所述的單克隆抗體的恒定區基因序列等同于所有BALB/c小鼠來源IgG2a抗體的相應序列，與靶抗原特異結合的所述的可變區(含關鍵CDR序列和附屬骨架區序列)具有SEQ?ID?NO：4所示的DNA序列。

具體的，與靶抗原特異結合的所述的可變區中的關鍵CDR1序列包括SEQ?ID?NO：5所示的DNA序列(ACG?GTT?AGC?TCAAGT?GTAAGT?TCCAGT?TAC?TTG)。

具體的，與靶抗原特異結合的所述的可變區中的關鍵CDR2序列包括SEQ?ID?NO：6所示的DNA序列(AGG?ACT?TCC?AAC?CTG?GCT?TCT)。

具體的，與靶抗原特異結合的所述的可變區中的關鍵CDR3序列包括SEQ?ID?NO：7所示的DNA序列(CAC?CAG?TATCAT?CGT?TCC?CCA?CGGACG)。

進一步的，所述的表達人絨毛膜促性腺激素β亞基蛋白的腫瘤包括但不限于HeLa細胞、或者HepG2細胞、或者HL-60細胞、或者7721細胞、或者K562細胞、或者SKOV3細胞、或者PC-3細胞。