[發明專利]抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體及其制備方法

無效

• 申請號: 200710048067.2
• 申請日: 2007-11-09
• 公開（公告）號: CN101429249A
• 公開（公告）日: 2009-05-13
• 發明（設計）人: 熊思東;于寧;徐薇
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C07K16/26
• 分類號: C07K16/26;G01N33/531;G01N33/577;C12N15/13;C12N5/18
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司
• 代理人: 嚴新德

1.一種抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體，其特征在于：所述的單克隆抗體特異性結合人絨毛膜促性腺激素β亞基蛋白、或者特異性結合表達人絨毛膜促性腺激素β亞基蛋白的腫瘤細胞。

2.如權利要求1所述的抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體，其特征在于：所述的人絨毛膜促性腺激素β亞基蛋白具有SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列。

3.如權利要求1所述的抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體，其特征在于：所述的人絨毛膜促性腺激素β亞基蛋白具有SEQ?ID?NO：2所示的DNA序列。

4.如權利要求1所述的抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體，其特征在于：所述的單克隆抗體的恒定區基因序列等同于所有BALB/c小鼠來源IgG2a抗體的相應序列，與靶抗原特異結合的所述的抗體可變區具有SEQ?ID?NO：3所示的氨基酸序列。

5.如權利要求1所述的抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體，其特征在于：所述的單克隆抗體的恒定區基因序列等同于所有BALB/c小鼠來源IgG2a抗體的相應序列，與靶抗原特異結合的所述的抗體可變區具有SEQ?ID?NO：4所示的DNA序列。

6.如權利要求5所述的抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體，其特征在于：與靶抗原特異結合的所述的可變區中的關鍵CDR1序列包括SEQID?NO：5所示的DNA序列。

7.如權利要求5所述的抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體，其特征在于：與靶抗原特異結合的所述的可變區中的關鍵CDR2序列包括SEQID?NO：6所示的DNA序列。

8.如權利要求5所述的抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體，其特征在于：與靶抗原特異結合的所述的可變區中的關鍵CDR3序列包括SEQID?NO：7所示的DNA序列。

9.如權利要求1所述的抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體，其特征在于：所述的表達人絨毛膜促性腺激素β亞基蛋白的腫瘤包括HeLa細胞、或者HepG2細胞、或者HL-60細胞、或者7721細胞、或者K562細胞、或者SKOV3細胞、或者PC-3細胞。

10.一種制備如權利要求1所述的的抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述的制備方法中包括一個獲得編碼人絨毛膜促性腺激素β亞基蛋白基因DNA的步驟，包括一個構建含有編碼人絨毛膜促性腺激素β亞基蛋白基因的質粒的步驟，包括一個利用表達質粒免疫小鼠的步驟，包括一個利用獲得的分泌高效價抗hCGβ抗體的小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞進行融合的步驟，包括一個反復篩選得到分泌抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體的雜交瘤細胞株的步驟，包括一個利用獲得的雜交瘤細胞株分泌抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體的步驟。

11.如權利要求10所述的抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述的制備方法包括以下步驟：

(1)獲得編碼hCGβ蛋白的基因DNA；

(2)通過酶切位點插入真核表達質粒載體中；

(3)將表達質粒通過肌肉注射方式免疫；

(4)免疫后以ELISA方法證實小鼠血清中誘導了高效價的抗hCGβ抗體后，分離得到小鼠脾細胞，與B淋巴細胞瘤進行融合，篩選永生化的分泌抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體的融合雜交瘤細胞株；

(5)利用獲得的雜交瘤細胞株分泌的抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體。

12.如權利要求11所述的抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述的小鼠為BALB/c小鼠。

13.如權利要求11所述的一種抗人絨毛膜促性腺激素β亞基的單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述的真核表達質粒載體為TR421、或者pcDNA3、或者pVAX。