[發(fā)明專(zhuān)利]太子參不定根的誘導(dǎo)及組織培養(yǎng)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710047951.4
• 申請(qǐng)日: 2007-11-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101142897A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈偉;高先富;趙愛(ài)華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00;C12N5/04
• 代理公司: 上海交達(dá)專(zhuān)利事務(wù)所
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種植物技術(shù)領(lǐng)域的培養(yǎng)方法，特別是一種太子參不定根的誘導(dǎo)及組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

太子參為石竹科植物孩兒參(Pseudostellaria?heterophylla(Miq.)Pax?exPax?ex?Hoffm)的干燥塊根，是《中國(guó)藥典(第五版)》收載的常用補(bǔ)益類(lèi)中藥，具有益氣健脾、生津潤(rùn)肺之功效，臨床常用于治療脾虛體倦、食欲不振、病后虛弱、氣陰不足、自汗口渴和肺燥干咳等。民間常用作強(qiáng)壯滋補(bǔ)品，尤其用于治療小兒脾虛而食欲不振。現(xiàn)代化學(xué)和藥理學(xué)研究表明，太子參主要含有環(huán)肽類(lèi)、三萜皂苷類(lèi)、多糖及游離氨基酸等成分，具有抗應(yīng)激、抗疲勞、耐缺氧和延緩衰老等功能。太子參中具有重要生理活性的一類(lèi)物質(zhì)是環(huán)肽類(lèi)化合物，已鑒定結(jié)構(gòu)的共有12種環(huán)肽。文獻(xiàn)報(bào)道Pseudostellaria?B具有顯著地抑制酪氨酸激酶活性從而阻止黑色素的生成作用，環(huán)肽能形成限制性構(gòu)象，與相應(yīng)的線性肽相比具有更好的抗酶解和抗化學(xué)降解的能力，因此該類(lèi)化合物在生物醫(yī)藥和化妝品等行業(yè)中具有重要應(yīng)用前景。近年來(lái)，太子參的市場(chǎng)需求日益擴(kuò)大，而野生資源遭到人為掠奪性采挖，導(dǎo)致市場(chǎng)價(jià)格不斷上漲，影響了相關(guān)產(chǎn)業(yè)，如醫(yī)藥、化妝品等的應(yīng)用發(fā)展。

不定根是由植物愈傷組織誘導(dǎo)分化產(chǎn)生的離體植物器官，不定根培養(yǎng)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)組織培養(yǎng)新技術(shù)。與藥用植物的懸浮培養(yǎng)細(xì)胞相比，不定根有效成分含量穩(wěn)定；和大田栽培的植物相比，不僅有效成分含量高且穩(wěn)定、生長(zhǎng)速度快，而且節(jié)省土地資源，因此不定根培養(yǎng)適合于藥用植物尤其是根類(lèi)藥材如太子參的組織培養(yǎng)，以獲得組織培養(yǎng)物或其有效成分。

經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的查新，目前尚無(wú)有關(guān)太子參不定根的組織培養(yǎng)及其有效成分生產(chǎn)方法的文獻(xiàn)報(bào)道和應(yīng)用，而僅有的太子參懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系30天僅增長(zhǎng)5倍。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種太子參不定根的誘導(dǎo)及組織培養(yǎng)方法，使其具有簡(jiǎn)便易行，不定根誘導(dǎo)率高、液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度快的特點(diǎn)，所獲得的太子參不定根生長(zhǎng)速度可以達(dá)到18天增長(zhǎng)46.1倍。

本發(fā)明是通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明包括以下步驟：

(1)太子參愈傷組織的誘導(dǎo)與培養(yǎng)：取太子參不同部位外植體，經(jīng)消毒洗滌后，無(wú)菌條件下將外植體切割，置愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，于無(wú)菌避光條件下誘導(dǎo)愈傷組織。小心剝離生長(zhǎng)快速、色澤淡黃的愈傷組織，置相同培養(yǎng)基上擴(kuò)增培養(yǎng)，擴(kuò)增的愈傷組織用于誘導(dǎo)不定根；

(2)太子參不定根的誘導(dǎo)與培養(yǎng)：取來(lái)自不同部位生長(zhǎng)快速、色澤淡黃的愈傷組織，置于含吲哚丁酸、萘乙酸、激動(dòng)素中的一種或一種以上植物激素的1/2?MS固體培養(yǎng)基上，于無(wú)菌避光條件下誘導(dǎo)不定根；

(3)太子參不定根液體培養(yǎng)：取步驟(2)獲得的不定根，置含有吲哚丁酸、萘乙酸中的一種或一種以上植物激素的1/2MS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

步驟(1)中所述的外植體是指野生太子參的莖、葉片、塊根和須根中的任一種。

步驟(1)中所述的消毒洗滌是指經(jīng)75％(v/v，下同)乙醇浸泡消毒30秒和1％(w/v，下同)次氯酸鈉(有效氯含量)浸泡消毒15～30分鐘，無(wú)菌水洗滌5次。

步驟(1)中所述的將外植體切割是指將莖和須根切段(1cm)、葉片切片(1cm×1?cm)和塊根切塊(0.5?cm×0.5?cm×0.3?cm)。

步驟(1)中所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是指：含1.0mg/L～3.0?mg/L2，4-二氯苯氧乙酸和0.1mg/L～0.5?mg/L激動(dòng)素的MS固體培養(yǎng)基，所述MS固體培養(yǎng)基由MS液體培養(yǎng)基添加5g/L瓊脂制成，pH?5.8。

步驟(1)中所述的無(wú)菌避光條件下誘導(dǎo)愈傷組織，是指于20℃～25℃無(wú)菌避光條件下培養(yǎng)18天-28天誘導(dǎo)愈傷組織。

步驟(2)中所述的1/2?MS固體培養(yǎng)基(MS固體培養(yǎng)基中硝酸銨濃度減半的培養(yǎng)基，下同)，是指含0.1mg/L～5mg/L吲哚丁酸、0.1mg/L～3?mg/L萘乙酸、0.1mg/L～0.5mg/L激動(dòng)素中的一種或一種以上植物激素的培養(yǎng)基。

步驟(2)中所述的無(wú)菌避光條件下誘導(dǎo)不定根，是指于20℃～25℃無(wú)菌避光條件下培養(yǎng)25天-35天誘導(dǎo)不定根。

步驟(3)中所述的培養(yǎng)基，是指含有0.1mg/L～5?mg/L吲哚丁酸和0.1mg/L～3?mg/L萘乙酸中的一種或一種以上植物激素的1/2MS液體培養(yǎng)基(MS液體培養(yǎng)基中硝酸銨濃度減半的培養(yǎng)基，下同)。

步驟(3)中所述的培養(yǎng)，是指在搖床轉(zhuǎn)速為80?r/min～120?r/min、溫度20℃～25℃條件下培養(yǎng)15天～21天。