[發(fā)明專利]日本血吸蟲膜蛋白基因TSP2的克隆、表達(dá)和應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710046635.5
• 申請(qǐng)日: 2007-09-29
• 公開（公告）號(hào): CN101397558A
• 公開（公告）日: 2009-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 傅志強(qiáng);林矯矯;王欣之;姚利曉;苑純秀;楊健美;劉金明;馮新港
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12N15/09
• 分類號(hào): C12N15/09;C12N1/21;C12N15/30;A61K48/00;A61P33/12;C12R1/19
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司
• 代理人: 王 巍

1.一種日本血吸蟲膜TSP2基因在大腸桿菌中的克隆和表達(dá)方法，其特征在于所述日本血吸蟲膜TSP2基因具有如下序列：

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2、一種權(quán)利要求1所述日本血吸蟲膜TSP2基因在大腸桿菌中的表達(dá)方法，其特征在于該方法包括下列步驟：

(1)據(jù)SjTSP2第二個(gè)膜外區(qū)SjTSP2EM2兩端序列設(shè)計(jì)引物，并在其擴(kuò)增序列的5＇端和3＇端分別引入EcoR?I和Sal?I酶切位點(diǎn)，通過PCR擴(kuò)增得到含第二個(gè)膜外區(qū)SjTSP2EM2的基因片段；

(2)將SjTSP2EM2的基因定向克隆至原核表達(dá)載體pET28c(+)及pGEX-4T-2的多克隆位點(diǎn)區(qū)，構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒SjTSP2EM2/pET28c及SjTSP2EM2/pGEX-4T-2；

(3)將上述兩種重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta(DE3)，并在LB固體劃培養(yǎng)基線挑單菌落制備菌種，將菌種接種于LB培養(yǎng)基，用IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)，收集細(xì)菌后，按非變性條件下His親合層析操作流程純化重組抗原rSjTSP2EM2/HIS和用純化GST融合蛋白的方法純化SjTSP2EM2/GST重組蛋白。

3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的日本血吸蟲膜TSP2基因在大腸桿菌中的表達(dá)方法，其特征在于表達(dá)的是第332位到第574位核苷酸編碼第二個(gè)跨膜區(qū)EM2，對(duì)應(yīng)的蛋白是第105位到第185位氨基酸。

4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的日本血吸蟲膜TSP2基因在大腸桿菌中的表達(dá)方法，其特征在于所使用的宿主菌為大腸桿菌Rosetta(DE3)，原核表達(dá)質(zhì)粒為pET28c(+)，表達(dá)的重組蛋白是帶有HIS標(biāo)簽的融合蛋白。

5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的日本血吸蟲膜TSP2基因在大腸桿菌中的表達(dá)方法，其特征在于所使用的宿主菌為大腸桿菌Rosetta(DE3)，原核表達(dá)質(zhì)粒為pGEX-4T-2，表達(dá)的重組蛋白是帶有GST標(biāo)簽的融合蛋白。