[發(fā)明專利]一種同時測定水果中多種多酚類化合物含量的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710045638.7
• 申請日: 2007-09-06
• 公開（公告）號: CN101126752A
• 公開（公告）日: 2008-02-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張晉芬;袁冰;徐華龍;沈偉
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 滕懷流

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及水果多酚類化合物的含量測定方法，使用通常的高效液相色譜儀，特定的色譜條件，就可以完成水果中沒食子酸、原兒茶酸、兒茶素、綠元酸、表兒茶素、咖啡酸、阿魏酸或蘆丁等多酚類化合物的測定，得到準(zhǔn)確的結(jié)果。

背景技術(shù)

水果多酚具有藥用及食用價值，由于多酚獨(dú)特的化學(xué)和生物學(xué)特性，從食用植物中提取多酚并將其純化，可作為天然的食品添加劑，調(diào)節(jié)食品風(fēng)味，并起到抗氧化(高效、無毒且具有保健性)和防腐作用。水果中多酚類化合物不僅具有藥用及食用價值，也是水果成熟度的重要指標(biāo)之一。常用的測定酚類的方法有紫外分光光度法、薄層色譜法、高效液相色譜法及毛細(xì)管電泳法。紫外分光光度法和薄層色譜法只能測定總酚或某一種多酚含量，不能確定具體種類和含量。高效液相色譜法操作簡便、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好，可同時定量測定多種多酚化合物，能確定具體種類和含量。但目前研究的多酚種類相差較多，且僅局限于蘋果、葡萄、柑橘等少量水果。另外制備水果樣品時通常使用榨汁法，榨汁法雖然很簡便，但由于樣品中含水量過高，多酚含量過低，所以不易準(zhǔn)確測量，且有些多酚的榨汁提取效率低。許多水果果汁不能直接用于測量，需除去里面所含的類脂、類胡羅卜素和葉綠素等物質(zhì)，還有些果汁中多酚需經(jīng)水解后方可測量，方法較復(fù)雜。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種操作簡單、準(zhǔn)確性好、效率高的水果中多種多酚類化合物同時測定的方法。

本發(fā)明同時測定水果中多種多酚類化合物含量的高效液相色譜法包括下述步驟：

1.分別用濃度為10～50％(體積百分比)的甲醇水溶液作溶劑制備各種多酚不同濃度梯度在0.02～0.2g/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液；

2.制備待測樣品：選果肉(或果皮)-切碎-烘干-搗碎，制得水果粉劑樣品，將上述的甲醇水溶液按料液質(zhì)量比1∶6～10加入粉劑樣品，用可調(diào)功率微波化學(xué)反應(yīng)器以功率150W～300W進(jìn)行微波萃取5～20min。將微波萃取后的萃取液過濾，用同樣的甲醇水溶液把過濾后的萃取液稀釋為粉劑樣品質(zhì)量濃度為10～100g/L的待測液，在定容時向體系中加入Carrez(卡瑞)試劑I和II各0.05～0.25ml進(jìn)行凈化處理。搖勻、靜置；

3.使用包括四元泵(可梯度洗脫即可)、恒溫箱、紫外檢測器以及工作站所組成的HPLC儀。在反相鍵合色譜柱上，以甲醇/稀磷酸為其流動相梯度洗脫分離沒食子酸、原兒茶酸、兒茶素、綠元酸、表兒茶素、咖啡酸、阿魏酸和蘆丁。

色譜條件如下：

分析柱：反相鍵合硅膠色譜柱；

流動相：甲醇/0.002～0.02mol/L的磷酸水溶液；

流速：0.5～1.2ml/min；

洗脫方式：梯度洗脫；

檢測：UV?240～300nm；

溫度：20～35℃；

進(jìn)樣體積：15.0～25.0μL；

分別取0.20μm或0.45μm針頭過濾器過濾后的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行譜圖及回歸曲線的測定。經(jīng)處理后的待測樣品用0.20μm或0.45μm針頭過濾器過濾后進(jìn)樣，在上述色譜條件下測定多酚類化合物含量。

4.依據(jù)色譜峰面積，利用外標(biāo)法由各標(biāo)準(zhǔn)溶液的回歸方程計(jì)算樣品中各多酚類化合物的含量。

本發(fā)明中洗脫梯度為流動相A和流動相B在0～25min內(nèi)體積比在2.0∶98.0～80∶20梯度范圍。本發(fā)明中待測樣品的制備采用微波萃取處理待測組分。本發(fā)明中待測樣品的制備時使用Carrez試劑即卡瑞試劑作為樣品凈化劑。本發(fā)明中反向鍵合色譜柱為C₈或C₁₈硅膠色譜柱，當(dāng)反相鍵合色譜柱為C₈硅膠色譜柱時，本發(fā)明能在16min內(nèi)完成對一個水果樣品的定量檢測。本發(fā)明中用外標(biāo)法計(jì)算多酚類化合物的含量。本發(fā)明中測定的多酚類化合物為沒食子酸、原兒茶酸、兒茶素、綠元酸、表兒茶素、咖啡酸、阿魏酸和蘆丁。本發(fā)明中水果樣品是蘋果皮、梨皮、香蕉皮、蘋果肉或梨肉。

在樣品制備時，本發(fā)明采用了微波萃取處理水果的被測組分，微波萃取是一種較新的提取水果中多酚的方法，微波具有高效性與高度選擇性。

本發(fā)明采用了Carrez試劑即卡瑞試劑作為樣品凈化劑處理樣品不僅可達(dá)到凈化樣品、保護(hù)色譜柱的目的，同時測量精度和回收率都不同程度得到提高。