[發明專利]測定糧食中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和雪腐鐮刀菌烯醇的方法

無效

• 申請號: 200710036512.3
• 申請日: 2007-01-16
• 公開（公告）號: CN101226173A
• 公開（公告）日: 2008-07-23
• 發明（設計）人: 郭紅衛;馬易怡;李星
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N1/34;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬分析化學領域，具體涉及一種測定脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和雪腐鐮刀菌烯醇在糧食中含量的方法。

背景技術

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)，又名為嘔吐毒素(vomitoxinor?vomiting?toxin，VT)，以及雪腐鐮刀菌烯醇(Nivalenol，NIV)都是某些鐮刀菌(主要是禾谷鐮刀菌)產生的毒素，屬B族單端孢霉稀族毒素。DON的結構為3α，7α，15-三羥基-12、13-環氧單端孢霉-9烯-8酮，NIV的結構為3α，4β，7α，15-四羥基-12、13-環氧單端孢烯-9烯-8酮。DON和NIV的結構式如下：

DON和NIV的毒性包括急性毒性、慢性和亞慢性毒性、細胞毒性、致突變、致畸、致癌作用及免疫毒性。它們主要在田間浸染小麥、玉米等谷類作物。DON是赤霉病麥中毒的主要病原物質。當人誤食入受污染的糧谷作物時，其典型癥狀是嘔吐，有地方稱其為“醉谷病”。

現有技術公開的測定糧谷中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和雪腐鐮刀菌烯醇的方法有薄層色譜法；填充柱氣相色譜法；酶聯免疫法(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的檢測)等。其中，薄層色譜法，由于隨機誤差以及不確定因素太多，導致其測定結果不是很穩定；并且薄板測定方法的檢出限大于125μg/kg；填充柱氣相色譜法，其中填充柱的制備較為繁復，且與毛細氣相色譜相比分離能力較低；酶聯免疫法，影響因素太多以及抗體制備復雜，且在一系列研究方面與毛細氣相色譜法比較顯示出了酶聯免疫方法的缺點。

發明內容

本發明的目的是提供一種簡便而準確的能同時測定糧食中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和雪腐鐮刀菌烯醇含量的方法。

本發明方法采用毛細氣相色譜法測定谷物以及豆類中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的含量。

本發明方法對糧食類待測樣品經過樣品預處理后，加入反應溶劑以及衍生化試劑進行衍生化反應，然后采用毛細色譜法測定脫氧雪腐鐮刀菌烯醇與雪腐鐮刀菌烯醇衍生物的濃度，再經過換算成糧食類樣品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及雪腐鐮刀菌烯醇的含量。

本發明采用DB-5MS毛細氣相色譜柱以及微池電子捕獲檢測器(μECD)，測定谷物以及豆類糧食類樣品中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的含量，明顯提高了檢測的靈敏度以及準確度。

本方法的毛細氣相色譜儀操作條件為DB-5MS毛細柱，載氣流速1.8～2.5ml/min；溫度為氣化室300～350℃；μECD?300～350℃，層析柱250～300℃。

本發明方法測定糧食類樣品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇與雪腐鐮刀菌烯醇含量準確、可靠。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇出峰時間為4.9分鐘左右，線性范圍9～150μg/kg，線性相關系數r＝0.99952，最小檢出量1.78μg/kg。雪腐鐮刀菌烯醇出峰時間為7.1分鐘左右，線性范圍50～800μg/kg，線性相關系數r＝0.99353，最小檢出量24.7μg/kg。谷類中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇回收率86％以上，RSD小于9.8％，雪腐鐮刀菌烯醇回收率80％以上，RSD小于6％。

本發明對面粉，玉米，豆類共20份糧食樣品進行毛細氣相色譜法與現有技術的國家標準GB/T5009.111-2003的第二法中規定采用的酶聯免疫(ELISA)測定結果比較，所得的結果經Wilcoxon秩和檢驗，P＝0.5，顯示統計學上沒有顯著差異。

本發明方法與酶聯免疫法比較，具有回收率高，精密度好，變動系數小等優點，測定結果準確，能極大地提高工作效率，，顯示出如下顯著優勢：

(1)本發明方法的回收率為86.84％～101.85％，變異系數＜10％；酶聯免疫方法的回收率為85～110％，變異系數＜10％，本發明方法的回收率區間更窄，方法更可靠；

(2)最低檢出限：酶聯免疫方法檢測下限為18.5μg/kg，本發明方法的檢測下限為1.78μg/kg，本發明方法的靈敏度以及檢測能力可達到酶聯免疫方法的10倍；

(3)成本以及效率：本發明方法采用了DB-5MS毛細柱以及先進的毛細氣相色譜儀自動進樣，且配備精密的紀錄軟件，操作大為簡便；

(4)本方法的待測樣品穩定時間可維持12個小時以上，但酶聯免疫法的樣品需要在完成后的10分鐘以內完成；本方法的樣品不受數量多而影響前后樣品反應時間不同而造成誤差，相反，酶聯免疫方法由于受到嚴格的時間限制，采用的是微量注射器，所以帶來的系統誤差大，且每批樣品不可太多，檢測操作較繁瑣。