[發明專利]一種蜂膠藥材的鑒別方法及蜂膠藥材產區的初步分類方法

有效

• 申請號: 200710028678.0
• 申請日: 2007-06-19
• 公開（公告）號: CN101327224A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發明（設計）人: 林勵;王小平;鄭堯隆;潘建國;盧占列
• 申請（專利權）人: 廣州市寶生園有限公司;廣州中醫藥大學
• 主分類號: A61K35/64
• 分類號: A61K35/64;G01N30/02;G01N30/86;G06F19/00
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技術領域

本發明涉及蜂膠藥材的鑒別方法及蜂膠藥材產區的初步分類方法，特別涉及一種用模式化的高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜來鑒別蜂膠藥材方法。

背景技術

蜂膠(propolis)是蜜蜂從植物芽苞和樹干處采集的樹膠，混入蜜蜂上顎腺分泌物和蜂蠟等形成的一種具有芳香味的膠狀固形物。蜂膠化學成分與蜂種和蜜蜂生活周圍地區的植被有關，已知的蜂膠化學成分有上百種，如果用一、二個蜂膠的活性成分來說明蜂膠及其成方制劑的內在質量，具有一定的片面性，應當對它的物質群整體予以控制。所以，除了“微觀分析”外，還應用某種“宏觀分析”方法，從整體上有效的表征中藥質量。蜂膠是一種富含黃酮類物質純天然蜂產品，楊樹等植物分泌的樹膠是蜂膠的原料，蜜蜂采集樹膠后經制作形成了蜂膠。蜂膠具有抗菌、抗病毒、抗氧化、降血糖、降血脂、提高免疫力等多種醫療保健功能，是一種具有廣闊市場的保健品原料。2003年國內蜂膠年產量已達到300噸，2005年版中國藥典已將蜂膠作為中藥材加以收載。但社會上以次充好、以假當真的個案屢見不鮮，不但無法確定其產地，甚至出現了以樹膠冒充蜂膠的現象。而目前對蜂膠的質量控制，主要是以白楊素、高良姜素等含量為指標(中國藥典2005年版一部249頁)。然而，由于蜂膠源于樹膠，其成分也近似于樹膠，因此，現行的藥典方法及行業標準等均無法區分樹膠與蜂膠，使得蜂膠質量控制難以實施，已顯著影響了人們生活質量和蜂膠的出口創匯。因此需要應用模式指紋圖譜技術等率先建立蜂膠質控平臺，確保蜂膠質量穩定可控。

發明內容

本發明的目的是通過建立一種區分蜂膠產區的模式指紋圖譜應用技術，可很好地區分樹膠與蜂膠，并初步辨別蜂膠的產地，明確其在醫藥衛生及食品化工方面的應用范圍，從而顯著提高蜂膠質控水平，確保其應用價值和經濟效益。

本發明的一種蜂膠藥材的鑒別方法，包括如下步驟：

(1)、建立蜂膠的指紋圖譜

(a)供試品溶液的制備：分別取多批蜂膠藥材粉末，精密稱定，置索氏提取器中，用丙酮索氏提取至提取液無色，提取液水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解，置容量瓶中，甲醇定容至刻度，為供試品溶液；

(b)對照品溶液的制備：分別精密稱定蘆丁、槲皮素、白楊素、高良姜素對照品適量，用流動相稀釋，制成對照品溶液；

(c)色譜條件：色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為：A：甲醇，B：酸水；采用梯度洗脫方式；流速1.0mL/min；檢測波長：283nm或256nm或365nm或360nm；柱溫：20-30℃。

(d)測定：分別精確吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，分別注入高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法進行試驗，以對照品為參照物，測定并記錄色譜圖，得到蜂膠HPLC指紋圖譜(見附圖1-圖2)。

(2)、以上述相同的方法測定楊樹膠等假蜂膠的指紋圖譜(見附圖3)。

(3)、所述蜂膠指紋圖譜共有29個共有峰，與楊樹膠的指紋圖譜對比，從峰高及其大小排序的差別比較可以看出：19號共有峰和21號共有峰的峰高及其大小排序等參數反映出楊樹膠和蜂膠的差別，因此，19號共有峰(RT＝66.61min)和21號共有峰(RT＝78.37min)共同形成了樹膠和蜂膠相互區別的特征峰。

(4)、以上述相同的方法測定待測樣品的指紋圖譜。

(5)、將待測蜂膠樣品指紋圖譜與蜂膠的指紋圖譜對比，篩選符合蜂膠標準指紋圖譜的蜂膠藥材。

上述步驟的第一步中，所述蜂膠供試品溶液的具體制備過程為：分別取多種蜂膠藥材粉末約1g，精密稱定，置索氏提取器中，用丙酮100ml，索氏提取至提取液無色，提取液水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解，置100ml量瓶中，甲醇定容至刻度，為供試品溶液。

所述色譜條件為色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為；A：甲醇，B：0.4％的磷酸水；采用梯度洗脫方式：0min→10min→20min→30min→35min→50min→60min→120min，甲醇：35％→35％→45％→45％→50％→50％→55％→55％，0.4％的磷酸水：65％→65％→55％→55％→50％→50％→45％→45％；流速：1.0mL/min；檢測波長：283nm；柱溫：25℃。

上述步驟第一步中所述對照品溶液每ml中含蘆丁0.268mg、槲皮素0.1096mg、白楊素0.0296mg、高良姜素0.0206mg。

上述步驟第一步中所述蜂膠為26批我國不同產地所產的蜂膠。

上述步驟第五步中：