[發明專利]一種檢測葡萄糖的酶電極的制備方法

有效

• 申請號: 200710025323.6
• 申請日: 2007-07-23
• 公開（公告）號: CN101105471A
• 公開（公告）日: 2008-01-16
• 發明（設計）人: 金萬勤;徐南平;華卉;劉鈺
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司
• 代理人: 徐冬濤;袁正英

技術領域

本發明涉及一種酶電極的制備方法，尤其涉及一種高靈敏度的檢測葡萄糖的酶電極的制備方法，所制備的電極可以應用于食品或醫藥衛生中低濃度葡萄糖的檢測。

背景技術

自Clark等報道了基于測量O₂還原電流的生物傳感器以來[Clark?L?C.[P]USA：3529455，1970]，這一領域得到了廣泛、深入的研究，不同類型的氧化酶結合鉑電極組成的電流型生物傳感器被大量應用于實踐。這些生物傳感器多是利用直接電化學法檢測酶反應的物質或產物且不能檢測低濃度的分析物，此外由于測量氧的還原電流時，電流的大小深受Pt電極(或其它貴金屬電極)表面狀態影響，使得測量的重現性差，因此在目前報道的生物傳感器中基于鉑電極法測量H₂O₂氧化電流的酶傳感器的應用更加廣泛。可以催化過氧化氫的氧化或還原的電化學無機介體如普魯士藍(PB)用于氧化酶生物傳感器的組裝，可以使應用電勢大大下降，隨之可以避免許多電化學的干擾。基于使用PB修飾電極的葡萄糖傳感器的第一個例子是由Karyakin等[KaryakinA.A.，Gitelmacher?O.，Karyakina?E.E..AAnal.Lett..1994，27(15)：2861-2869.]報道的，其在1995年又繼續優化了這個傳感器[Karyakin?AA，Gitelmacher?O?V，Karyakina?E?E.Anal.Chem..1995，67：2419-2423]，這種生物傳感器有低的檢測限和寬的線性范圍。目前，基于PB的傳感器的研究其中一個主要的問題就是靈敏度不夠。

發明內容

本發明的目的是提供一種高靈敏度的檢測葡萄糖的酶電極的制備方法，適用于食品或醫藥衛生中低濃度葡萄糖的檢測，且方法簡單易行，具有可控度性，有較高的靈敏度。

本發明的技術方案為：一種檢測葡萄糖的酶電極的制備方法，其具體制備步驟如下：

1)將聚陽離子或聚陰離子電解質與酸液配制成離子水溶液，將支撐體電極進行預處理，然后浸入到聚陽離子電解質中，使支撐體電極表面帶上正電荷；或者將預處理后的支撐體浸入到聚陰離子電解質中，則支撐體電極表面帶上負電荷；

2)將經上述步驟處理后帶上正電荷支撐體電極先浸入K₄Fe(CN)₆或K₃Fe(CN)₆和KCl的水溶液，用N₂吹干，再浸入相同濃度的FeCl₃或(NH₄)₂Fe(SO₄)₂和KCl水溶液中，用N₂吹干；或者是將處理后帶上負電荷支撐體電極先浸入FeCl₃或者(NH₄)₂Fe(SO₄)₂和KCl的水溶液中，用N₂吹干再浸入相同濃度的K₄Fe(CN)₆或者K₃Fe(CN)₆和KCl的水溶液，用N₂吹干；

3)重復步驟2)1-80次，得到聚電解質/普魯士藍膜電極；

4)分別配制葡萄糖氧化酶溶液和兩種不同濃度的明膠溶液，明膠溶液2的濃度要大于明膠溶液1的濃度；取葡萄糖氧化酶溶液與明膠溶液1混合均勻；移取上述混合溶液均勻滴于步驟3)制得的電極上，置于冰箱中；然后再將處理后的電極表面浸漬到明膠溶液2中后取出，置于冰箱中后取出，得高靈敏度的檢測葡萄糖的酶電極。

其中所述的聚陰離子電解質為聚苯乙烯磺酸鈉、聚乙烯磺酸鹽、硫酸葡聚糖、硫酸軟骨素、海藻酸鈉、聚丙烯酸鈉、聚甲基丙烯酸、肝素或硫酸肝素中的一種或其中任意兩種的混合物；所述的聚陽離子電解質為聚烯丙基胺鹽、聚聯丙烯基二甲基銨氯化物、聚乙烯醇、膠原、殼聚糖、多聚賴氨酸或聚乙烯基亞胺鹽酸鹽中的一種或其中任意兩種的混合物。聚陰離子或聚陽離子電解質與酸液配制成離子水溶液中，聚陰離子或聚陽離子電解質濃度為0.005-0.05mol/L，離子溶液的pH值控制在1-4。

其中所述的支撐體電極為金屬電極或玻璃電極。