[發明專利]花生四烯酸油脂的制備方法

有效

• 申請號: 200710025003.0
• 申請日: 2007-07-09
• 公開（公告）號: CN101109015A
• 公開（公告）日: 2008-01-23
• 發明（設計）人: 黃和;金明杰;任路靜;劉欣;李霜;胡南;彭超
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司
• 代理人: 徐冬濤;劉成群

技術領域

本發明涉及微生物發酵生產方法，具體涉及利用微生物生產花生四烯酸油脂的制備方法。

背景技術

花生四烯酸(Arachidonic?Acid，簡稱AA，即5，8，11，14-二十碳四烯酸)屬于ω-6系列長鏈多不飽和脂肪酸。AA是一種重要的人體必需脂肪酸，是許多二十碳酸衍生物如前列腺素E₂(PGE₂)、前列環素(PGI₂)、血栓烷A₂(TXA₂)、白三烯Leukotirene?B₄(LTB4)和C₄(LT?C₄)的直接前體，這些生物活性物質對脂蛋白的代謝、血液流變學、血管彈性、白細胞功能和血小板激活等具有重要的調節作用。AA還具有調節體內多種離子通道作用，維持細胞膜功能，控制細胞膜的通透性，維持機體保水性等許多重要的生理功能。同時，AA是構成神經組織的重要結構脂類，它對嬰幼兒的腦發育和視力功能至關重要。它能幫助神經系統的信息正常傳遞，增強記憶，對人體視力、大腦功能和協調能力起著極為重要的作用。鑒于AA對嬰幼兒生長的重要作用，世界衛生組織(WHO)及聯合國糧農組織(FAO)權威推薦：嬰幼兒每日應攝取40毫克AA(以每千克體重計算)，而歐洲和美國已經強制要求只有添加AA的嬰兒奶粉方可進入市場進行銷售。

AA廣泛存在于動物體中，過去商業AA主要來源于魚油、豬肝和蛋黃，但含量極低且不穩定、開發費用昂貴，難以滿足社會的需求，且魚油中含有大量二十碳五烯酸(EPA)。EPA在嬰兒體內抑制AA合成，所以最好提供的AA油脂中不含EPA。八十年代初期，人們相繼發現某些絲狀真菌及微藻類含有花生四烯酸。由于微生物具有生長速度快、油脂及AA含量高、發酵制備工藝比較簡單且不受原料限制等優點，利用微生物法生產花生四烯酸成為各國研究的熱點。國內在含有花生四烯酸的菌種培養與選育方面與國外相比具有一定的優勢，而且部分菌種已實現了工業化生產，但由于菌種中的花生四烯酸含量相比于其它多不飽和脂肪酸優勢并不明顯，使AA的富集難度加大，增加了花生四烯酸的市場推廣難度。如何改進花生四烯酸的培養工藝、降低其生產成本是當前花生四烯酸的研究熱點之一。

發明內容

本發明目的是提出一種花生四烯酸油脂的微生物制備方法。

本發明的目的是通過以下方法實現的：

一種花生四烯酸油脂的制備方法，該方法采用保藏編號為CCTCC?NO：M?207067的高山被孢霉Mortierella?alpina菌種ME-AA01生產花生四烯酸油脂。

所述的制備方法，包括下列步驟：將保藏編號為CCTCC?NO：M?207067的高山被孢霉Mortierella?alpina菌種ME-AA01活化培養，種子活化培養，搖瓶或發酵罐發酵培養，菌體的老化處理，收集濕菌體，烘干提取油脂。

所述的制備方法，其中菌種及種子活化培養過程為：將保藏編號為CCTCC?NO：M207067的高山被孢霉Mortierella?alpina菌種ME-AA01在PDA培養基上培養活化，每L?PDA培養基含：土豆200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000ml，121℃滅菌20分鐘，倒入試管制成斜面，冷卻后接入ME-AA01菌株，28℃培養5天，將菌絲接入搖瓶進行種子活化培養；搖瓶活化培養條件為：培養基包含質量體積比的下列物質：葡萄糖2％～6％、酵母膏0.3％～0.6％、KH₂PO₄?0.2～0.5％、NaNO₃?0.2％～0.5％、MgSO₄·7H₂O0.03～0.1％，其余為水，pH6.0～8.5，轉速：100～180rpm，溫度20～28℃，活化2～5天。

所述的制備方法，其中發酵培養過程為：活化后的菌種接入裝有發酵培養基的搖瓶或發酵罐中，接種量5％～20％v/v，發酵5～8天，溫度20～28℃，pH6.0～8.5，搖瓶發酵轉速：100～180rpm.發酵罐發酵時攪拌轉速：150～260rpm，壓縮空氣通氣量：0.2～2VVM。