[發(fā)明專利]花生四烯酸油脂的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710025003.0
• 申請日: 2007-07-09
• 公開（公告）號: CN101109015A
• 公開（公告）日: 2008-01-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃和;金明杰;任路靜;劉欣;李霜;胡南;彭超
• 申請（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 徐冬濤;劉成群

1.一種花生四烯酸油脂的制備方法，其特征在于該方法采用保藏編號為CCTCC?NO：M?207067的高山被孢霉Mortierella?alpina菌種ME-AA01生產(chǎn)花生四烯酸油脂。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的方法包括下列步驟：將保藏編號為CCTCC?NO：M?207067的高山被孢霉Mortierella?alpina菌種ME-AA01活化培養(yǎng)，種子活化培養(yǎng)，搖瓶或發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)，菌體的老化處理，收集濕菌體，烘干提取油脂。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的菌種及種子活化培養(yǎng)過程為：將保藏編號為CCTCC?NO：M?207067的高山被孢霉Mortierella?alpina菌種ME-AA01在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)活化，每L?PDA培養(yǎng)基含：土豆200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000ml，121℃滅菌20分鐘，倒入試管制成斜面，冷卻后接入ME-AA01菌株，28℃培養(yǎng)5天，將菌絲接入搖瓶進(jìn)行種子活化培養(yǎng)；搖瓶活化培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基包含質(zhì)量體積比的下列物質(zhì)：葡萄糖2％～6％、酵母膏0.3％～0.6％、KH₂PO₄?0.2～0.5％、NaNO₃?0.2％～0.5％、MgSO₄·7H₂O?0.03～0.1％，其余為水，pH?6.0～8.5，轉(zhuǎn)速：100～180rpm，溫度20～28℃，活化2～5天。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的發(fā)酵培養(yǎng)過程為：活化后的菌種接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶或發(fā)酵罐中，接種量5％～20％v/v，發(fā)酵5～8天，溫度20～28℃，pH?6.0～8.5，搖瓶發(fā)酵轉(zhuǎn)速：100～180rpm，發(fā)酵罐發(fā)酵時(shí)攪拌轉(zhuǎn)速：150～260rpm，壓縮空氣通氣量：0.2～2VVM。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包含質(zhì)量體積比的下列物質(zhì)：葡萄糖7％～15％、酵母膏0.6％～1.2％、KH₂PO₄?0.2％～0.6％、NaNO₃0.2％～0.6％、MgSO₄·7H₂O?0.05％～0.1％、泛酸鈣0.01％～0.2％以及維生素0.02％～0.1％，其余為水。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的發(fā)酵培養(yǎng)過后菌體的老化處理過程：將發(fā)酵5～8天結(jié)束的含有大量菌體的發(fā)酵液在一定溫度下進(jìn)行老化處理，老化處理過程中搖瓶或發(fā)酵罐停止攪拌或維持低攪拌速率，發(fā)酵罐不通氣或維持通氣，老化時(shí)加入碳源、氮源、無機(jī)鹽；其中，碳源選自淀粉水解糖、葡萄糖、麥芽糖、果糖、蔗糖、糊精、乳糖、半乳糖、木糖、脂肪酸、乙醇、乙酸、丙酮酸、富馬酸、蘋果酸和甘油的一種或多種，氮源選自豆餅粉、花生餅粉、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、魚粉、玉米漿、硝酸鉀、硝酸鈉、硫酸氨中的一種或多種，無機(jī)鹽選自磷酸二氫鉀、泛酸鈣、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、氯化鈣、硫酸鈉中的一種或多種。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于老化處理過程為：老化溫度5～25℃，老化周期：2～10天，pH范圍6.0～8.0，搖瓶轉(zhuǎn)速：0～80rpm，發(fā)酵罐攪拌轉(zhuǎn)速：0～80rpm，發(fā)酵罐老化時(shí)壓縮空氣通氣量：0～3VVM。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于老化時(shí)培養(yǎng)液中一次性或分批加入占培養(yǎng)液總體積的質(zhì)量體積比的下列物質(zhì)：乙醇1～8％；硝酸鉀0.1～0.6％；泛酸鈣0.01～0.2％；氯化鈣0.01～0.1％。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的油脂提取方法：將老化后的菌體收集、烘干、磨碎，用石油醚和乙醇萃取12小時(shí)，再將石油醚和乙醇通過減壓蒸餾除去即得到花生四烯酸油脂；其中，1體積的菌體用5～8體積的石油醚和乙醇進(jìn)行萃取。