[發明專利]蔗糖酶診斷/測定試劑盒及蔗糖酶活性濃度測定方法

無效

• 申請號: 200710024732.4
• 申請日: 2007-06-21
• 公開（公告）號: CN101329263A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種蔗糖酶診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定蔗糖酶活性濃度的方法，屬于醫學/食品檢驗測定技術領域。

背景技術

蔗糖酶(sucrase)的功能為將蔗糖水解成D-果糖和D-葡萄糖，又稱為轉化酶(invertase)或蔗糖酶(saccharase)。蔗糖酶-異麥芽糖酶缺乏，已知人類一旦缺少其中一種酶，就會產生對二糖無耐性的遺傳病，有可能它們是同在一個蛋白質上，屬單基因控制。蔗糖酶在高等植物蔗糖代謝中起著關鍵的作用。

蔗糖酶的檢測方法有：(1)Nelson法，其原理是：蔗糖酶可將蔗糖水解為葡萄糖和果糖，而葡萄糖在堿性溶液中能將Cu²還原；砷鉬酸試劑與氧化亞銅生成藍色復合物(砷鉬藍)，在510nm波長下有正比于還原糖濃度的光密度，從而確定蔗糖酶的濃度。(2)水楊酸法：蔗糖酶能使蔗糖水解成葡萄糖和果糖，葡萄糖與3，5-二硝基水楊酸共熱后被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定濃度范圍內，葡萄糖的量和棕紅色物質顏色深淺程度成一定比例。(3)用鄰甲苯胺試劑比色測定。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，連續監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定蔗糖酶活性濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的蔗糖酶診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行蔗糖酶活性濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明蔗糖酶活性濃度測定方法原理如下：

蔗糖蔗糖酶D-葡萄糖+D-果糖

D-果糖+還原型輔酶甘露醇脫氫酶甘露醇+輔酶

這種方法應用蔗糖酶(sucrase；EC?3.2.1.48)偶聯甘露醇脫氫酶(Mannitol?dehydrogenase；EC?1.1.1.138；EC?1.1.1.67)酶促反應連續監測法。蔗糖酶酶解蔗糖反應產生果糖，再通過偶聯甘露醇脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的速度，通過測量340nm處吸光度下降的速度，可以測算蔗糖酶的活性濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明蔗糖酶診斷/測定試劑較為理想：

緩沖液??????????100mmol/L

穩定劑??????????500mmol/L

還原型輔酶??????0.25mmol/L

蔗糖????????????30mmol/L

甘露醇脫氫酶????????10000U/L

本發明的蔗糖酶診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、甘露醇脫氫酶、蔗糖。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、蔗糖。

試劑2

緩沖液、穩定劑、甘露醇脫氫酶。

還原型輔酶、甘露醇脫氫酶、蔗糖在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶。

試劑2

緩沖液、蔗糖。

試劑3

緩沖液、穩定劑、甘露醇脫氫酶。

還原型輔酶、甘露醇脫氫酶、蔗糖在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無論是單劑、雙劑還是三劑，本發明測定蔗糖酶活性濃度的方法，其還原型輔酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一種。

具體實施方式

下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。

實施例一

本實施例的蔗糖酶診斷/測定試劑為單試劑，包括：