[發明專利]鉀診斷/測定試劑盒及鉀濃度測定方法

無效

• 申請號: 200710024728.8
• 申請日: 2007-06-21
• 公開（公告）號: CN101329356A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/84
• 分類號: G01N33/84;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
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技術領域

本發明涉及一種鉀診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定鉀濃度的方法，屬于醫學/食品/環境檢驗測定技術領域。

背景技術

血清鉀三個決定性水平的臨床意義：低于參考值下限，表現低鉀血癥，其原因有腎小管疾病，高醛固酮癥，胰島素過多癥，代謝性堿中毒，利尿劑治療、胰島素治療糖尿病酮癥時鉀離子轉移至細胞內等。高于參考值上限，可能由腎小球疾病、腎功能衰弱、糖尿病酮癥中毒、腎上腺皮質功能減退等。當血鉀高達7.5mmol/L或以上時病人將出現心律失常，應考慮確定適當的治療方案。血清鉀超過10mmol/L時，即可發生心室纖顫，心臟停搏而死亡。高鉀使心臟停跳于舒張期。

目前鉀測定常用的方法有：同位素稀釋質譜法、中子活化法、火焰光度計法、化學測定法、離子選擇電極法、原子分光光度法、酶動力學法。

火焰光度法1950年開始使用并一直沿用至今的火焰光度法檢測血清、尿液、腦脊液及胸腹水的Na⁺和K⁺，是一種發射光譜分析法。測定方法分為內標準法和外標準法兩種。外標準法操作誤差較大，一般不采用?，F在主要使用內部標準法，即標本及標準液采用加進相同濃度的內部標準元素鋰或銫進行測定。操作時，將含鋰的溶液作為稀釋液，同時測定K、Na和Li的濃度，以標本與標準液的Na/Li與K/Li比值，計算Na、K濃度。由于血清稀釋倍數大，血清蛋白質粘性的影響幾乎可忽略不計。

化學測定法主要利用復環王冠化合物如穴冠醚或球冠醚，亦稱為冠醚，均為離子載體進行測定，由于大環結構內有空穴，分子內部氧原子有未共用電子對可與金屬離子結合，根據空穴大小，可選擇性結合不同直徑的金屬離子，從而可達到測出離子濃度的目的。測定血清K，一般采用普通冠醚陰離子染料進行比色定量。

離子選擇電極法ISE法是采用靈敏的特定專用電極，在專用儀器上進行血清和尿等體液的K⁺、Na⁺的測定，因標本用量少，快速準確，幾乎有取代其他方法的趨勢。其儀器測定原理是離子選擇電極與參比電極組合浸泡在待測標本溶液中，進行檢測。目前已有的電極種類為：①玻璃膜電極，感應材料為玻璃薄膜的有pH電極、K⁺電極和Na⁺電極；②固相膜電極，由難溶性金屬物質加壓成型，以固體膜或單日膜作為感應膜的電極有Cl^-電極和F^-電極；③液態膜電極，將環氧樹脂或內裝聚氯乙稀為感應膜的Ca²⁺電極；④用纈氨霉素膜制成的K⁺電極。上述電極均有一定的壽命，因為電極使用一段時間就會自動老化，有效期長短不一。

原子分光光度法原子分光光度法可用于檢測血清K+、Na+，操作繁雜，誤差較大，不及火焰光度法簡便。

鉀測定的決定性方法是同位素稀釋質譜法及中子活化法。WHO推薦的方法是火焰光度計法。目前離子選擇電極法應用較為普遍，但是電極成本昂貴。

酶測定法和火焰光度計法或離子選擇電極法均有較好的一致性，且抗干擾性強，穩定性好，彌補了生化分析儀不能同時測定鉀鈉的不足。有較好的分析性能，易于自動化，在臨床化學分析中必定取代火焰光度計法成為常規分析項目。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶循環擴增法(EnzymaticRecycling?Method)、酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定鉀濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的鉀診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行鉀濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明鉀濃度測定方法原理如下：

腺苷二磷酸+磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶/K⁺腺苷三磷酸+丙酮酸

丙酮酸+氨離子+還原型輔酶丙氨酸脫氫酶L-丙氨酸+水+輔酶

丙氨酸+水+氧甘氨酸氧化酶氨離子+丙酮酸+過氧化氫