[發明專利]麥冬皂苷D在制備調控血管內皮細胞信號轉導基因藥物中的應用

無效

• 申請號: 200710024566.8
• 申請日: 2007-06-22
• 公開（公告）號: CN101084913A
• 公開（公告）日: 2007-12-12
• 發明（設計）人: 張旭;陸兔林;蔡寶昌;王明艷;毛春芹;張小燕;張志潔;楊進
• 申請（專利權）人: 南京中醫藥大學
• 主分類號: A61K31/7048
• 分類號: A61K31/7048;A61P9/00;C12Q1/68;C07H1/08
• 代理公司: 南京蘇高專利事務所
• 代理人: 闕如生

一、技術領域

本發明涉及麥冬皂苷D在制藥中的新用途，具體地說是涉及麥冬皂苷D在制備調控血管內皮細胞周期基因藥物中的應用，屬中藥技術領域。

二、背景技術

1.麥冬通過保護血管內皮細胞來完成養陰行血之功效

麥冬為臨床滋養陰液的常用之品，是養陰生津的代表藥物之一。麥冬，百合科植物麥冬Ophiogon?japonicus(Thumb.)Ker-Gawl.的干燥塊根。主要含多種糖甙：麥門冬皂苷B、D，23，24二羥基羅斯考皂，麥冬甙元-3-O-a-L-吡喃鼠李糖基(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖甙，甲基麥冬黃烷酮A、B，麥冬黃烷酮A、B，6-醛基異麥冬黃烷酮A、B，麥冬甙元，丙三醇以及β-谷甾醇、豆甾醇。另含揮發油，從中分得長葉烯、α-廣藿香烯、β-廣藿香烯、香附子烯、愈創奧烯、α-律草烯、樟腦、芳樟醇等成分。麥冬始載于《神農本草經》，味甘、微苦，性微寒，歸肺、胃、心經。具有養陰生津、潤肺清心的功效。

前期研究發現養陰代表中藥麥冬的藥物血清胚層有效部位群/組分/成分，具有不同程度的保護血管內皮細胞的作用，其中正丁醇部位的藥效作用更為顯著，以標準品麥冬皂苷D為對照進行高效液相分析發現，其中含有麥冬皂苷D成分。

2.麥冬皂苷D的研究進展

沿階草屬麥冬主產于四川綿陽，三臺和浙江慈溪，蕭山等地。杭麥冬與川麥冬的總皂苷的含量差異與栽培年限相關，杭麥冬生長周期為2～3年，川麥冬的栽培期為1年。不同產地麥冬的單體成分麥冬皂苷B、D含量也有較大差別，杭麥冬主含麥冬皂苷B、含少量皂苷D；而川麥冬主含麥冬皂苷D、含少量皂苷B。

研究發現麥冬皂苷D可顯著抑制靜脈血栓模型大鼠早期外周血中性粒細胞活化、粘附；減輕血栓重量；降低血清sICAM-1含量；其副作用低；麥冬皂苷D還可下調大鼠靜脈血栓部位TF蛋白表達，并抑制MAPKp38和JNK磷酸化，提示麥冬皂苷D可通過影響上述信號通路，降低炎癥反應，抑制血栓形成。另麥冬皂苷有顯著性的抗炎作用，魯斯可皂苷元和麥冬皂苷D為其中的兩種活性成分。

同種不同產地樣品中麥冬皂苷D的含量有較大差別，浙江產麥冬含量較低，四川產麥冬含量較高。對浙江產麥冬、四川產麥冬不同批次樣品測定，發現麥冬皂苷D的含量差別較大，且同一產地浙江產麥冬中麥冬皂苷D的含量相差更大。生長年限對麥冬皂苷D的含量有一定的影響，年限長，含量略有增加。因此麥冬皂苷D含量的高低僅僅可作為川麥冬質量指標，而不適合作為浙麥冬質量的指標。

由于皂苷為一類極性較大，結構復雜的化合物，它無紫外吸收，無專一顯色劑，再加上麥冬皂苷測定經常受糖的干擾，若采用紫外檢測末端吸收法，則靈敏度低，且有干擾峰，無法使用。因此，我們采用比色法測定麥冬總皂苷含量為0.2855％，利用HPLC-ELSD法測定麥冬皂苷D的含量為0.03229％。為進一步獲取其內在成分的信息，我們進行了ESI-TOF-MS測試，以ESI正離子為麥冬皂苷主要電離方式，乙腈-水梯度洗脫，205nm為檢測波長提取紫外色譜圖，確定35.52min為麥冬皂苷D，其裂解方式為先脫去與巖藻糖(1→2)連接的鼠李糖及(1→3)連接的木糖，后脫去巖藻糖。采用兩種測試方法全面綜合分析麥冬皂苷D。

3.麥冬皂苷D的提取分離

取5~10目麥冬藥粉，加10倍量70％乙醇，熱回流提取3次，每次2h。合并提取液，減壓濃縮至無醇味。然后，將其溶于1000mL水中，用3倍量乙酸乙酯振搖提取3次，得到乙酸乙酯提取物和水層。將水層繼續用3倍量正丁醇振搖提取3次，得到正丁醇提取物和水層，合并正丁醇液，用0.1mol/L?NaOH振搖提取2次，棄去0.1mol/L?NaOH。將正丁醇提取物進行大孔樹脂柱洗脫，依次用水、10％乙醇、30％乙醇、60％乙醇、95％乙醇和乙醇梯度洗脫，分別得到相應的洗脫物。60％乙醇洗脫物經硅膠柱色譜，水飽和正丁醇洗脫，得到麥冬皂苷D。

三、發明內容

本發明的目的在于提供麥冬皂苷D在制藥中的新用途，具體地說是提供麥冬皂苷D在制備調控血管內皮細胞信號轉導基因藥物中的應用。

保護血管內皮細胞是防治心腦血管病癥的重要環節