[發明專利]半乳糖診斷/測定試劑盒及半乳糖濃度測定方法

無效

• 申請號: 200710023384.9
• 申請日: 2007-06-13
• 公開（公告）號: CN101324580A
• 公開（公告）日: 2008-12-17
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/66
• 分類號: G01N33/66;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種半乳糖診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定半乳糖濃度的方法，屬于醫學/食品檢驗測定技術領域。

背景技術

牛奶在營養界素有“液體黃金”的美稱，我國早在1992年由七部位聯合提出：“一杯牛奶強壯一個民族”的口號。奶類除不含纖維素外，幾乎含有人體所需要的各種營養素。牛奶中的乳糖進入人體后，經小腸乳糖酶作用分解成葡萄糖和半乳糖。半乳糖是嬰兒大腦發育的必需物質，與嬰兒大腦的迅速成長有密切關系。

牛奶雖好但并不是所有的人都能享受，有些人由于乳糖酶的缺乏，人體不能很好的消化吸收牛奶中的營養素，還會造成鈣、磷、鉀、鐵等元素的吸收障礙，影響嬰幼兒的體格和智力發育，在老年人中，乳糖酶缺乏是造成骨質疏松的重要原因。中國成年人飲用牛乳后乳糖吸收不良的發病率高達86.7％，不耐受指數為0.9。

為了避免不適當飲奶對健康造成的損害，因此最好在飲奶前檢查自己是否耐受乳糖，在飲用牛奶后，測試尿液中半乳糖的濃度，這是目前國外最常用的一種方法，更為簡便、經濟、可靠。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定半乳糖濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的半乳糖診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行半乳糖濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明半乳糖濃度測定方法原理如下：

半乳糖+氧半乳糖氧化酶半乳糖hexodialdose+過氧化氫

過氧化氫+還原型輔酶NADH過氧化物酶輔酶+2水

這種方法應用半乳糖氧化酶(galactose?oxidase；EC?1.1.3.9)偶聯NADH過氧化物酶(NADH?peroxidase；EC?1.11.1.1；EC?1.11.1.2)酶促反應連續監測法/終點比色法。半乳糖氧化酶酶解半乳糖反應產生過氧化氫，再通過偶聯NADH過氧化物酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度/速度，通過測量340nm處吸光度下降的程度/速度，可以測算半乳糖的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明半乳糖診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液????????????????????????????100mmol/L

穩定劑????????????????????????????500mmol/L

還原型輔酶????????????????????????0.25mmol/L

半乳糖氧化酶????????????????????????????12000U/L

NADH過氧化物酶??????????????????????????16000U/L

本發明的半乳糖診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、半乳糖氧化酶、NADH過氧化物酶。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶。

試劑2

緩沖液、穩定劑、半乳糖氧化酶、NADH過氧化物酶。

還原型輔酶、半乳糖氧化酶、NADH過氧化物酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶。

試劑2

緩沖液、穩定劑、NADH過氧化物酶。

試劑3

緩沖液、穩定劑、半乳糖氧化酶。

還原型輔酶、半乳糖氧化酶、NADH過氧化物酶在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。