[發明專利]一種快速篩選具有吸附特性的多環芳烴降解菌的方法

無效

• 申請號: 200710010803.5
• 申請日: 2007-03-30
• 公開（公告）號: CN101050421A
• 公開（公告）日: 2007-10-10
• 發明（設計）人: 張穎;王榮;任瑞霞;徐慧;李慧;史榮久
• 申請（專利權）人: 中國科學院沈陽應用生態研究所
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C12N1/26;B09C1/10
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司
• 代理人: 張志偉

1、一種快速篩選具有吸附特性的多環芳烴降解菌的方法，其特征在于：結合多環芳烴水溶性很低、極易吸附在顆粒物上的特性，利用吸附性載體富集及分離多環芳烴降解菌，采用雙層平板法進行初篩，并用液相色譜技術測定其對多環芳烴的降解效率，最終從污染土壤中篩選到降解菌；

多環芳烴降解菌的富集及分離，包括：

在三角瓶內添加吸附性載體，載體是改善土壤質地常用的珍珠巖、稻殼，以載體遮蓋住三角瓶底部為宜，用紗布包好，并于121℃濕熱滅菌20min；將1mg/mL的多環芳烴丙酮溶液50uL噴灑在載體上，靜置2h，使丙酮自然揮發，最后加入40mL無機鹽液體培養基和10mL土壤懸液，30℃避光搖床培養；每10天取3g-4g載體轉接到新鮮配制的含載體無機鹽液體培養基中；30天后將載體取出，用無菌水沖洗土壤顆粒和非吸附的菌體，置于以多環芳烴為唯一碳源的含制霉菌素的無機鹽固體培養基平板上，30℃培養4～6天；將載體周圍菌苔刮下，在上述平板上劃線分離單菌落，斜面保存；其中，

無機鹽液體培養基的組成如下：K₂HPO₄?1g；KH₂PO₄?1g；NaCl?0.5g；NH₄Cl?1g；MgSO₄·7H₂O?0.2g；CaCl₂?15mg；FeSO₄·7H₂O?2mg；CuSO₄·5H₂O0.4mg；KI?1mg；MnSO₄·H₂O?4mg；H₃BO₃?5mg；CoCl₂·6H₂O?1mg；Na₂MoO₄·2H₂O?2mg；NiCl₂·6H₂O?2mg，溶于1L蒸餾水中；pH7.0±0.2；

含載體的無機鹽液體培養基的組成如下：在三角瓶內先添加吸附性載體，加入量以載體遮蓋住三角瓶底部為宜，用紗布包好121℃濕熱滅菌20min；待其冷卻后，將1mg/mL的多環芳烴丙酮溶液50uL噴灑在載體上，靜置2h，使丙酮自然揮發，然后加入50mL無機鹽液體培養基；

以多環芳烴為唯一碳源的含制霉菌素的無機鹽固體培養基的組成如下：K₂HPO₄?1g；KH₂PO₄?1g；NaCl?0.5g；NH₄Cl?1g；MgSO₄·7H₂O?0.2g；CaCl₂?15mg；FeSO₄·7H₂O?2mg；CuSO₄·5H₂O?0.4mg；KI?1mg；MnSO₄·H₂O4mg；H₃BO₃?5mg；CoCl₂·6H₂O?1mg；Na₂MoO₄·2H₂O?2mg；NiCl₂·6H₂O?2mg，溶于1L蒸餾水中，加入20g瓊脂，pH7.0±0.2；分裝在4個500mL的三角瓶中，每個三角瓶裝250mL培養基，121℃濕熱滅菌20分鐘；倒平板時，每個三角瓶中加入12.5mg的制霉菌素、0.25mg多環芳烴并混勻。