[發明專利]含O型口蹄疫病毒IRES RNA的病毒樣顆粒與制備方法及應用

無效

• 申請號: 200710008843.6
• 申請日: 2007-04-17
• 公開（公告）號: CN101058803A
• 公開（公告）日: 2007-10-24
• 發明（設計）人: 陳亮;竇敏;張國廣;張紅心;曾雅明
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12Q1/70;G01N33/569;C12N15/42
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種病毒樣顆粒，尤其是涉及一種可在RNA病毒檢測中應用的含O型口蹄疫病毒IRES?RNA的病毒樣顆粒及其制備方法。

背景技術

RNA病毒是以RNA為遺傳物質的病毒，例如禽流感病毒、口蹄疫病毒和SARS病毒等。因為這些RNA病毒具有嚴重的危害性，所以其快速準確的檢測就顯得至關重要。檢測RNA病毒常用的方法有傳統的病毒分離試驗、血凝抑制試驗、病毒中和試驗和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)等，以及分子生物學檢測技術如核酸依賴的擴增技術(NASBA)(Romano?J?W，Will-iams?K?G，Shurtliff?R?N，et?al.NASBA?technology：isothermal?RNA?amplification?in?qualitativeand?quantitative?diagnostics[J].Immunol.Invest，1997，26(1-2)：15-28)、常規RT-PCR、實時RT-PCR技術和PCR-ELISA技術等。其中實時熒光PCR是近幾年發展起來的新檢測技術，具有分析靈敏度高和簡便快捷等方面的優點，在RNA病毒快速診斷中優勢明顯(Spackman?E，Senne?D?A，Bulaga?L?L，et?al.Development?of?real-time?RT-PCR?for?the?detection?of?avianinfluenza?virus.Avian?Dis，2003，47(3Suppl)：1079-1082；Heid?C?A，Stevens?J，Livak?J?K，et?al.Real?time?quantitative?PCR[J].Genome?Res，1996，6(10)：986-994)。

RNA病毒在PCR基礎上的定性和定量檢測中，影響因素較多，如實驗人員測定操作中的隨機誤差、擴增儀孔間溫度的差異、標本核酸提取后抑制物的殘留、待擴增靶核酸的濃度和逆轉錄的效率及試劑的問題等，這些因素均可能會影響PCR擴增的效率，進而造成結果的偏差，甚至假陰性的結果，所以RNA病毒的PCR測定必須使用質控品和標準品，才能保證結果的可靠性。傳統的RNA病毒擴增檢測的質控品和標準品有兩種：一種為裸露的RNA或者原病毒顆粒，另一種為體外轉錄cDNA。前者容易被廣泛存在的核糖核酸酶降解且具有傳染性，后者不能反應樣品提取和逆轉錄過程對測定的影響。